リンパ節のマイクログラフトの実現化に向けた基礎的研究

Research Project

Project/Area Number	23K09090
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
Allocation Type	Multi-year Fund
Section	一般
Review Section	Basic Section 56070:Plastic and reconstructive surgery-related
Research Institution	Aichi Medical University
Principal Investigator	古川洋志愛知医科大学, 医学部, 教授 (00399924)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	田中真美 (茂利真美) 愛知医科大学, 医学部, 助教 (00634156) 有沢宏貴愛知医科大学, 医学部, 助教 (50850707) 渡辺秀人愛知医科大学, 分子医科学研究所, 教授 (90240514) 梅本泰孝愛知医科大学, 医学部, 講師 (90465526)
Project Period (FY)	2023-04-01 – 2026-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help	¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000) Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000) Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000) Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Keywords	リンパ節移植 / 細胞外基質 / リンパ浮腫 / 組織破砕器 / マイクログラフト
Outline of Research at the Start	我々は血管吻合を必要としないリンパ節移植術の開発に注力してきたが、動物実験で血管吻合やリンパ管吻合を省略してリンパ節を移植すると、その成績は安定しない。我々が吻合なしでリンパ節移植を行ったところ、28日後の組織学的解析では生着率は 63%であった。そこで我々は臨床で既に使用が始まっている組織破砕器を用いて、リンパ節の構造を一旦破砕して移植するマイクログラフト法が再建術式として成立するかを検証することとした。組織破砕器は海外で広く流通している機器を使用するので、手技の再現性が担保され、しかも得られた知見は臨床へ速やかに還元される。
Outline of Annual Research Achievements	リンパ節を組織破砕器で破砕して懸濁液として移植する試み（マイクログラフト法）、懸濁液のゲル化（コラーゲンとフィブリン）後に、人工真皮併用による移植方法へ研究を進めたが、移植着1週間後の免疫染色では、リンパ節様の構築を認めることがなかった。検証のため、セルブロック法で移植直前の懸濁液をトリパンブルー染色で観察したが、生きた細胞塊が観察された。死細胞数と生細胞数の比率は17：121、生存率は約88%であった。そこで期間を4週間と延長し、人工真皮との併用移植と、生理食塩水と人工真皮の移植との比較を実施している段階である。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 移植後の検体での病理組織検討で、未だリンパ組織の確認が免疫染色でできていないため。
Strategy for Future Research Activity	移植後に細胞が残っているかどうかを検証することとなった。ラットリンパ節由来の細胞をマイクログラフト法で採取後、蛍光色素（CellBrite TM）でラベリングしてから移植し、1週間後摘出段階において蛍光色素で標識された細胞が残っていることを確認することとした。2024年5月5日にラベリングした細胞の移植を行った。