| Project/Area Number |
23K09394
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | Nagoya City University |
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Principal Investigator |
岡部 一登 名古屋市立大学, 医薬学総合研究院(医学), 講師 (50801453)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | 放射線性顎骨壊死 / エクソソーム / 骨髄由来間葉系幹細胞 / 酸素環境 |
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| Outline of Research at the Start |
放射線治療は頭頸部がんに対して高い治療効果を有するが、様々な有害事象を必発する。特に晩発性の放射線性顎骨壊死は著しくQOLを低下させるにも関わらず、未だ治療法が確立していない。昨今、難治性疾患に対して、間葉系幹細胞が分泌するエクソソームを用いた新たな治療法が期待されている。エクソソームの組成は培養環境に依存するとされており、本研究では放射線性顎骨壊死をターゲットにして酸素環境が及ぼす影響を最適化し、エクソソームを用いた新たな治療法を確立する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
放射線治療は頭頸部がんに対して高い治療効果を有するが，口腔粘膜炎や口腔乾燥等の有害事象を必発する.特に晩期に発症する顎骨壊死(ORNJ)は著しくQOLを 低下させるにもかかわらず，未だ治療法は確立していない.研究代表者の最終目的は，難治性疾患であるORNに対して，ヒト骨髄間葉系幹細胞(MSCs)由来エクソソーム（EVs）を用いた治療法を開発することである．培養環境により，MSCsは遺伝子発現や細胞挙動が変化する．特に酸素環境により，EVsの組成が変化することに本研究では着目し，ORNJに対して優れた治療効果を示すEVsを分泌する最適条件を探索する．
MSCsを20％，10％，2％O2の各酸素環境下で培養した後，培養上清から超遠心法によりEVsを回収した．粒径は約100nmであり，ウエスタンブロット法で特異的表面抗原であるCD63，CD81，CD9 を確認した.また透過型電子顕微鏡により形態学的評価を実施した.各環境下で回収したEVsの分泌量を比較した．
現在は，放射線照射したラットMSCsと各環境下で回収したEVsとの共培養による効果に関する評価を開始している．評価項目として，分化能および遊走能，増殖能，血管新生能としている．分化能として， 共培養したラットMSCsを骨芽細胞，脂肪細胞へ分化誘導後にアリザリンレッドS染色，オイルレッドO染色により評価する．遊走能および増殖能は，Gap Closureアッセイ，MTTアッセイで評価する．血管新生能は，各EVsとヒト臍帯血静脈内皮細胞との共培養によるTube formation assayにより評価する．分化能や血管新生能について，骨および血管関連遺伝子であるRunx2，OCN，VEGF-α等の発現量をRT-PCR法でも評価する．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
進捗状況が遅延していることの最大の理由として，研究代表者の研究環境が変わったことが大きい．また，現在着手している実験内容を実施することに支障はないが，安定した結果が得られておらず，テクニカルエラー等の問題点の確認をしている.
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| Strategy for Future Research Activity |
現在着手している内容は時間を要し，テクニカルエラーも生じやすい．前所属施設の研究者に相談することは容易であり，現在の所属施設に本研究における手技，内容に精通している研究者が所属しており，協力体制が整っている．定期的なミーティングを開催し，問題点を随時解決し，研究を推進する予定である．
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