| Project/Area Number |
23K09667
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 58020:Hygiene and public health-related: including laboratory approach
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| Research Institution | Niigata University |
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Principal Investigator |
生駒 俊和 新潟大学, 医歯学総合研究科, 客員研究員 (60612744)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
土屋 康雄 新潟大学, 医歯学総合研究科, 客員研究員 (60334679)
浅井 孝夫 順天堂大学, 医療科学部, 准教授 (60612736)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2025: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2023: ¥650,000 (Direct Cost: ¥500,000、Indirect Cost: ¥150,000)
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| Keywords | 胆嚢がん / インド / アンギノーサス群連鎖球菌 / 胆嚢胆汁 / 細菌感染 / リアルタイムPCR法 |
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| Outline of Research at the Start |
胆石は胆嚢がん(GBC)の最大のリスク要因であり、細菌感染もその一つとされている。応募者らは、GBC患者と胆石を有する胆嚢炎患者の胆汁中細菌叢をメタゲノム解析により調べ、アンギノーサス群連鎖球菌のDNAがGBC患者に特異的に検出されることを世界で初めて明らかにした。既に本菌は化膿性肝膿瘍や口腔がんなどの発症との関連が報告されており、GBC発症とも関連している可能性が示唆される。
本研究の目的は、我々の知見の妥当性を場所、時間、患者を変えて検証することである。リアルタイムPCR法を用いてGBC患者と胆嚢炎患者の胆汁中から本菌を検出・定量し、アンケート結果と比較して両者の関連性を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
2024年度は、インドのMahatma Gandhi Medical College & Hospital（MGMCH、ジャイプール）、All India Institute of Medical Sciences, Jodhpur（AIIMS、ジョドプール）、Sharda University (グレーター ノイダ)において、胆嚢がん患者とコントロールとした胆石を有する慢性胆嚢炎患者から胆嚢胆汁試料採取とアンケート調査を前年度から引き続き実施した。2025年3月末までに、胆嚢がん患者72例、胆嚢炎患者182例から胆汁試料の採取とアンケート調査を実施できた。しかし、研究開始当初目標とした胆嚢がん患者150例、胆嚢炎患者200例には達しなかった。このため、研究開始当初予定していた胆汁中からの市販キットを用いた細菌DNA抽出とアンケート結果のコンピュータ入力は2025年度以降に先延ばしをせざるを得ない状況となった。
胆汁中からの細菌DNA抽出キットを検討し、当初予定していたPureLink Genomic DNA Mini Kitに代わり、MagMAX Viral/Pathogen Ultra Nucleic Acid Isolation kit (Thermo Fisher Scientific Inc.）に変更することとした。また、Streptococcus anginosusの検出に用いるプライマー／プローブとしてTaqMan微生物検出アッセイ（Ba 07922557）を用いることとした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
研究開始当初は2024年度末までに胆嚢がん患者150例、胆嚢炎患者200例から胆汁試料を採取し、細菌DNA抽出、並びにアンケート結果をコンピュータ入力する予定であった。しかし、2024年度末までに、目標とした試料数を採取できなかったことから進捗状況は遅れていると判断せざるを得ない。胆嚢炎患者数は目標数の200例にほぼ達しているが、胆嚢がん患者数は目標数の150例の半数程度であるので、2025年10月まで試料採取とアンケート調査の継続をインド研究者に依頼し、できるだけ目標数に達するよう努めることとした。
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| Strategy for Future Research Activity |
2025年度は本研究の最終年度にあたることから、胆汁試料採取とアンケート調査を2025年10月まで継続して実施する。2025年11月に、市販キットのMagMAX Viral/Pathogen Ultra Nucleic Acid Isolation kit (Thermo Fisher Scientific Inc.）を用いて採取した胆汁試料からの細菌DNA抽出を実施する。同年12月に、Streptococcus anginosusの検出に用いるプライマー／プローブ（TaqMan微生物検出アッセイ、Ba 07922557）と標準菌株ATCC、及びリアルタイムPCRシステム（QuantStudio 3）、TaqPath Bacto Pure Microbial Detection Master Mix（いずれもThermo Fisher Scientific. Inc.）を用いて胆汁中にStreptococcus anginosusが存在するか否かを明らかにする。さらに12月、得られた遺伝子解析のデータとアンケートデータのコンピュータ入力を実施する。2026年1月から3月までにデータの統計解析を行い胆汁中のStreptococcus anginosus群と胆嚢がん発症の関係を明らかにする。さらに、本研究で得られたデータをまとめ論文執筆を行う予定である。
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