| Project/Area Number |
23K09758
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 58040:Forensics medicine-related
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| Research Institution | Kumamoto University (2024)
Gunma University (2023) |
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Principal Investigator |
佐野 利恵 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (70455955)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
早川 輝 秋田大学, 医学系研究科, 教授 (90758575)
高橋 遥一郎 筑波大学, 医学医療系, 教授 (50640538)
福田 治紀 群馬大学, 大学院医学系研究科, 助教 (00977895)
窪 理英子 群馬大学, 医学部, 技術職員 (40747127)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
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| Keywords | ＡＢＯ / エンハンサー / ABO遺伝子 / ABO式血液型 / ADAMTS13 / TAD |
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| Outline of Research at the Start |
予備実験及びゲノムアノテーションデータから、第９染色体長腕9q34.2にあるABO遺伝子とADAMTS13遺伝子がクロマチンループ構造により近接し，ABO遺伝子エンハンサー+22.6-kb siteがADAMTS13遺伝子の転写を活性化すると考えられる。本研究では，培養細胞やゲノム編集を用いたin vitro assay，病理組織切片を用いたin situ hybridization等からABO遺伝子とADAMTS13遺伝子の共同する転写調節機構を明らかにし，血栓症の病態解明を介して医療に貢献する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は、血液型抗原発現に関与する分子機構の解明を目的として、血管内皮由来の培養細胞株4種類を対象に、ABO遺伝子およびその関連遺伝子の発現状況について検討を行った。具体的には、定量的リアルタイムPCR法を用いてmRNAレベルでの発現解析を実施し、さらにフローサイトメトリー法を用いて、細胞表面における血液型抗原（A/B抗原）の発現状況を評価した。
その結果、いずれの血管内皮系細胞株においても、ABO遺伝子の発現は極めて低く、対応するA/B抗原の細胞表面発現も明確に検出されなかった。この結果は、現時点で使用している内皮系細胞株が、ABO遺伝子発現や抗原発現解析に適していない可能性を示唆するものであり、今後、より高いABO発現能を有する新規培養細胞株の探索・選定の必要性が明らかとなった。
一方で、これまでの研究で用いてきた血球系細胞株K562および上皮系細胞株KATOIIIを用いた薬物応答実験も継続的に実施している。本年度は、特にABOエンハンサー領域の有無が関連遺伝子の発現制御に与える影響について検討するため、野生型株とエンハンサー欠失株の比較解析を行った。これにより、ABOエンハンサーが単なるABO遺伝子自身の転写調節にとどまらず、周辺遺伝子の発現にも何らかの影響を及ぼしている可能性が示唆され、今後の解析を通じて新たな遺伝子ネットワークの存在が明らかになることが期待される。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究目的の達成のための手法が確立され、結果も出てきている。
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| Strategy for Future Research Activity |
培養細胞を用いた薬物添加実験を行い、定量的リアルタイムPCRによる比較検討、レポーターアッセイおよびChIPアッセイによる検討によりABOとADAMTS13の遺伝子発現の関連の機序を明らかにする。
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