• Search Research Projects
  • Search Researchers
  • How to Use
  1. Back to previous page

Integrated understanding and control of anti-obesity lipid-metabolizing enzymes using specific fluorescent probes

Research Project

Project/Area Number 23K10973
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (C)

Allocation TypeMulti-year Fund
Section一般
Review Section Basic Section 59040:Nutrition science and health science-related
Research InstitutionKawasaki Medical School

Principal Investigator

坪井 一人  川崎医科大学, 医学部, 准教授 (80346642)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 竹之内 康広  川崎医科大学, 医学部, 講師 (30582233)
北風 圭介  川崎医科大学, 医学部, 助教 (80840545)
田中 保  徳島大学, 大学院社会産業理工学研究部(生物資源産業学域), 教授 (90258301)
Project Period (FY) 2023-04-01 – 2026-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2023)
Budget Amount *help
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
Keywords脂質メディエーター / セラミダーゼ / N-アシルエタノールアミン / リソソーム酵素 / 加水分解酵素 / 食欲 / 肥満 / 脂質 / 生活習慣病 / 酵素 / 蛍光
Outline of Research at the Start

N-アシルエタノールアミンは食欲抑制・脂肪分解などの作用により生活習慣病の原因である肥満を抑制する脂質化合物であるが、その代謝機構には不明な点が多い。本研究では、脂肪酸アミド加水分解酵素、N-アシルエタノールアミン酸性アミダーゼ、酸性セラミダーゼの3種類のN-アシルエタノールアミン加水分解酵素のいずれが小腸で重要であるか、食物由来の脂肪酸により制御されているか、肥満を制御しているか、特異的蛍光プローブを作出して明らかにする。研究成果はこれらの酵素を標的とする新規抗肥満薬の創出に繋がるものである。

Outline of Annual Research Achievements

小腸で生合成されるN-アシルエタノールアミンは食欲抑制・脂肪分解などの作用を示す内因性の脂質化合物(脂質メディエーター)であり、生活習慣病の主要な原因である肥満を抑制的に制御すると考えられている。しかしながら、その代謝機構には不明な点が多い。本研究課題では特異的蛍光プローブを基盤として、本脂質化合物の生体内における加水分解反応を担う酵素を同定して生理的役割の解明を行うことを目指している。
N-アシルエタノールアミンの加水分解に関わる3種類の酵素のうち、まず、リソソーム酵素であるN-アシルエタノールアミン酸性アミダーゼ(NAAA)および酸性セラミダーゼ(AC)に焦点を当て、活性ベースの蛍光プローブの開発に向けて蛍光基質の検討を行った。NAAAの蛍光基質としてPAMCAが報告されている。そこで、ACとNAAAを発現するヒト前立腺LNCaP細胞のホモジネートのPAMCA水解活性を検討したところ、本活性はNAAA阻害薬ARN077の存在下で、あるいはsiRNA法によるNAAAのノックダウンによりほとんど消失し、PAMCAのNAAAに対する特異性を確認した。
次に、ACの蛍光基質の候補としてPAMCAのアナログであるLAMCAを検討した。LNCaP細胞のホモジネートのLAMCA水解活性は、AC特異的阻害薬SOCLACとNAAA特異的阻害薬ARN077のいずれによっても減少した。また、ACおよびNAAAのいずれのノックダウンによっても抑制された。従って、LAMCAはACとNAAAの両酵素によって加水分解されると考えられた。しかしながら、ARN077存在下での活性測定によりAC活性を評価できる可能性があり、今後さらなる解析を行うとともに、さらなる構造改変体についても検討したい。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究計画のうち、項目「蛍光プローブの作出」について、PAMCAアナログであるLAMCAを検討中である。他の項目についても準備を進めており、おおむね順調に進展していると言える。

Strategy for Future Research Activity

項目「蛍光プローブの作出」について、研究計画に記載した蛍光基質の開発を重点的に実施したい。さらに、他の項目「小腸上皮様細胞株を用いた解析」と「小腸オルガノイドおよび動物を用いた解析」についても研究を進展させる予定である。

Report

(1 results)
  • 2023 Research-status Report
  • Research Products

    (19 results)

All 2024 2023 Other

All Int'l Joint Research (3 results) Journal Article (3 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 3 results) Presentation (12 results) Remarks (1 results)

  • [Int'l Joint Research] Inst. for Adv. Chem. of Catalonia(スペイン)

    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Int'l Joint Research] Univ. of Virginia(米国)

    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Int'l Joint Research] Univ. Toulouse III-Paul Sabatier(フランス)

    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Journal Article] A fluorogenic substrate for the detection of lipid amidases in intact cells2024

    • Author(s)
      Casasampere Mireia、Ung Johnson、Inanez Alejandro、Dufau Carine、Tsuboi Kazuhito、Casas Josefina、Tan Su-Fern、Feith David J.、Andrieu-Abadie Nathalie、Segui Bruno、Loughran Thomas P.、Abad Jose Luis、Fabrias Gemma
    • Journal Title

      Journal of Lipid Research

      Volume: 65 Issue: 3 Pages: 100520-100520

    • DOI

      10.1016/j.jlr.2024.100520

    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
  • [Journal Article] GDE7 produces cyclic phosphatidic acid in the ER lumen functioning as a lysophospholipid mediator2023

    • Author(s)
      Kitakaze Keisuke、Ali Hanif、Kimoto Raiki、Takenouchi Yasuhiro、Ishimaru Hironobu、Yamashita Atsushi、Ueda Natsuo、Tanaka Tamotsu、Okamoto Yasuo、Tsuboi Kazuhito
    • Journal Title

      Communications Biology

      Volume: 6 Issue: 1 Pages: 524-524

    • DOI

      10.1038/s42003-023-04900-4

    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Genetic ablation of Saposin-D in Krabbe disease eliminates psychosine accumulation but does not significantly improve demyelination2023

    • Author(s)
      Takashi Watanabe, Kazuhito Tsuboi, Nobuaki Matsuda, Yuta Ishizuka, Shinji Go, Etsuko Watanabe, Ayaka Ono, Yasuo Okamoto, Junko Matsuda
    • Journal Title

      Journal of Neurochemistry

      Volume: 166 Issue: 4 Pages: 720-746

    • DOI

      10.1111/jnc.15876

    • Related Report
      2023 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] 線維化肺における脂質メディエーター分解酵素の発現低下メカニズム2023

    • Author(s)
      岡本安雄, 竹之内康広, 北風圭介, 松井玲奈, 石丸浩靖, 杉本理栄, 坪井一人
    • Organizer
      第100回日本生理学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 線維化に関連するオーファンGタンパク質共役型受容体Gpr176の機能解析2023

    • Author(s)
      岡本安雄, 松井玲奈, 古賀大輔, 竹之内康広, 北風圭介, 石丸浩靖, 坪井一人
    • Organizer
      第64回日本生化学会 中国・四国支部例会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] グリセロホスホジエステラーゼ7が産生する環状ホスファチジン酸はPPARγを抑制する脂質メディエーターとして機能する2023

    • Author(s)
      北風圭介, Hanif Ali, 木本来希, 竹之内康広, 石丸浩靖, 山下純, 上田夏生, 田中保, 岡本安雄, 坪井一人
    • Organizer
      第64回日本生化学会 中国・四国支部例会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] Krabbe病の神経病態はサイコシンの蓄積だけでは説明できない2023

    • Author(s)
      松田純子, 渡邉 昂, 坪井一人, 郷 慎司, 石塚佑太
    • Organizer
      第65回日本脂質生化学会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 線維化に応答するオーファンGタンパク質共役型受容体Gpr176の機能解析2023

    • Author(s)
      岡本安雄, 松井玲奈, 古賀大輔, 竹之内康広, 北風圭介, 石丸浩靖, 坪井一人
    • Organizer
      第143回日本薬理学会近畿部会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 線維化に促進的に働くGタンパク質共役型受容体Gpr176の同定2023

    • Author(s)
      岡本安雄, 松井玲奈, 古賀大輔, 竹之内康広, 北風圭介, 石丸浩靖, 坪井一人
    • Organizer
      第39回 創薬・薬理フォーラム岡山
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 線維化に促進的に働くGタンパク質共役型受容体Gpr176の同定2023

    • Author(s)
      岡本安雄, 松井玲奈, 古賀大輔, 竹之内康広, 北風圭介, 石丸浩靖, 坪井一人
    • Organizer
      第75回日本生理学会中国四国地方会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] オーファンGタンパク質共役型受容体Gpr176は線維芽細胞の活性化に関与する2023

    • Author(s)
      岡本安雄, 松井玲奈, 古賀大輔, 竹之内康広, 北風圭介, 石丸浩靖, 坪井一人
    • Organizer
      第96回日本生化学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 肺胞上皮細胞の老化は肺の線維化を促進する2023

    • Author(s)
      竹之内康広, 宇納恵大, 北風圭介, 杉本理栄, 石丸浩靖, 坪井一人, 岡本安雄
    • Organizer
      第96回日本生化学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] 前立腺がん細胞において小胞体ストレス応答はリゾリン脂質メディエーター産生酵素の発現を亢進する2023

    • Author(s)
      北風圭介, 鵜飼悠, 高峯大典, Jirapat Namkaew, 濱田良真, 竹之内康広, 坪井一人, 親泊政一, 岡本安雄
    • Organizer
      第96回日本生化学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] N-アシルエタノールアミン酸性アミダーゼおよび酸性セラミダーゼの蛍光基質に関する特異性解析2023

    • Author(s)
      坪井一人, 水田啓太, 北風圭介, 竹之内康広, 石丸浩靖, 岡本安雄
    • Organizer
      第96回日本生化学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Presentation] サポシンD欠損Twitcherマウスの神経病態はサイコシンの蓄積だけでは説明できない2023

    • Author(s)
      渡辺 昂, 坪井 一人, 石塚 佑太, 松田 純子
    • Organizer
      第96回日本生化学会大会
    • Related Report
      2023 Research-status Report
  • [Remarks] 川崎医科大学薬理学教室

    • URL

      https://kms-pharmacol.wixsite.com/website

    • Related Report
      2023 Research-status Report

URL: 

Published: 2023-04-13   Modified: 2024-12-25  

Information User Guide FAQ News Terms of Use Attribution of KAKENHI

Powered by NII kakenhi