| Project/Area Number |
23K15208
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
Basic Section 53030:Respiratory medicine-related
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
肥後 寿夫 岡山大学, 医歯薬学域, 助教 (50818143)
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| Project Period (FY) |
2023-04-01 – 2026-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2025: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
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| Keywords | 特発性肺線維症 / シングルセルRNAシーケンス |
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| Outline of Research at the Start |
特発性肺線維症は進行性に肺に線維化を来す原因不明の疾患であるが、2型肺胞上皮が病態の中心細胞ではないかと考えられている。そこで本研究では、肺移植摘出肺あるいは肺癌手術摘出肺の一断面を位置情報が分かる状態で分割保存し、特に2型肺胞上皮に注目して各部位の比較検討を行う。胸膜に近いエリアと中心に近いエリアからそれぞれ2型肺胞上皮を単離し、シングルセルRNA-seq解析を行う事でそれぞれの部位の2型肺胞上皮の特徴を明らかにする。この結果をもとに、特発性肺線維症肺組織の蛍光免疫染色を行い、蛋白レベルでの変化を評価する。これらの結果を通して、特発性肺線維症発症と2型肺胞上皮の関連を明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
まずシングルセルRNAシーケンスに用いるために、肺から上皮細胞を単離する手法の確立を目指した。肺移植摘出肺あるいは肺癌摘出肺を各種酵素等を用いて単細胞化し、FACSでEpCAM陽性細胞をソーティングし、上皮細胞を単離することができた。
肺移植で摘出された特発性肺線維症肺を一断面採取し、線維化部に隣接する部分と線維化部から離れた正常に近い部分それぞれ2か所ずつから上記手法でEpCAM陽性細胞を単離し、Chromium Fixed RNAプロファイリング用の保存液で別々に保存した。今後この4サンプルをChromium Fixed RNAプロファイリングで解析予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
肺から上皮細胞を単離する手法を確立でき、シングルセルRNAシーケンスに用いるサンプルも採取できているため、順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
Chromium Fixed RNAプロファイリングを用いて、保存された4サンプルのシングルセルRNAシーケンスを行う。各部位の上皮細胞の性質の違いが見いだされれば、FFPEサンプルを用いて免疫染色等で確認を行う予定である。
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