遺伝子改変マウスを用いたEBI3含有サイトカインの乾癬病態関与の解析

• Project/Area Number: 23K15269
• Research Category: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: Basic Section 53050:Dermatology-related
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 野村 隼人 岡山大学, 大学病院, 客員研究員 (40897873)
• Project Period (FY): 2023-04-01 – 2025-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2023)
• Budget Amount: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000); Fiscal Year 2024: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000); Fiscal Year 2023: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
• Keywords: 乾癬 / EBI3

Outline of Research at the Start

尋常性乾癬の病変部表皮角化細胞は過剰な細胞増殖と免疫応答を示している。我々は、乾癬病変部を模倣したサイトカイン刺激により表皮角化細胞におけるEBI3の遺伝子および蛋白の発現が増強すること、乾癬患者の病変部でEBI3の発現が上昇していることを見出した。EBI3を含むサイトカインとして、IL-27、IL-35、IL-39が挙げられるが、乾癬における役割は明らかでない。
本研究の目的は、globalおよび表皮特異的Ebi3ノックアウトマウスを用い、そのフェノタイプを解析すること、さらにイミキモド誘発乾癬モデルを用いることで、EBI3含有サイトカインの乾癬病態形成への関与について検討することである。

Outline of Annual Research Achievements

我々は乾癬病変部を模倣したサイトカイン刺激によって表皮角化細胞におけるEBI3（Epstein-Barr virus-induced gene 3）の発現が増強することを見出した。EBI3を含むヘテロ二量体サイトカインとしてIL-27（EBI3とp28）、IL-35（EBI3とp35）、IL-39（EBI3とp19）が挙げられるが乾癬病態における意義は分かっていない。本研究で我々はEbi3コンベンショナルノックアウト（KO）マウスとCre/loxPシステムを用いた表皮特異的Ebi3ノックアウトマウスKeratin5(K5)-Cre Ebi3 Floxedマウスを作成し、イミキモド誘発乾癬モデルを用いることでEBI3の乾癬病態形成への関与について検討する。Ebi3KOマウスの右耳にイミキモドを5日間連日塗布しイミキモド誘発乾癬モデルマウスを作成した。野生型と比較し耳介が厚くなる傾向を示し、組織学的に表皮の肥厚、炎症細胞の浸潤が強くみられた。定量PCRにおいて皮膚でのTNF、IL-6、IL-17A、CCL20などの炎症性サイトカイン、ケモカインの遺伝子発現が亢進した。表皮特異的にEbi3をノックアウトしたマウスによるイミキモド誘発乾癬モデルでも同様に検討した。野生型と比較し耳介の厚さ、炎症性サイトカインの発現に差は得られなかった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

作成予定の遺伝子改変マウスは完成し遺伝子欠損は確認できた。順次乾癬モデルマウスを用いて検討を行っていく。

Strategy for Future Research Activity

これまでの結果の再現性の確認、ELISA法、または免疫染色法による検討を行う。また、イミキモド以外の乾癬モデルマウスとして、テープストリッピング法やIL-23皮下注乾癬モデルの使用を検討する。同様に耳厚を測定するとともに、皮膚の肉眼的炎症所見、組織学的所見、皮膚組織中のサイトカイン、ケモカイン、抗菌ペプチド、表皮分化マーカーの発現をリアルタイムPCR法、ELISA法、または免疫染色法を行う。