| Project/Area Number |
23K19465
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Review Section |
0803:Pathology, infection/immunology, and related fields
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| Research Institution | Shiga University of Medical Science |
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Principal Investigator |
佐野 友亮 滋賀医科大学, 先端がん研究センター, 特任助教 (50985968)
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| Project Period (FY) |
2023-08-31 – 2025-03-31
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| Project Status |
Discontinued (Fiscal Year 2023)
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| Budget Amount *help |
¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2023: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | カニクイザル / 再生T細胞 / 癌モデル / 癌免疫療法 |
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| Outline of Research at the Start |
ヒトの腫瘍形成には少なくとも4つの遺伝子変異が必要とされており、 非ヒト霊長類の癌モデルは未だ例がない。そこで本研究では、4つの癌遺伝子を薬剤誘導性に発現するトランスジェニック (Tg) カニクイザルを作出し、正常な免疫システム存在下での癌免疫療法の効果を検証できる世界初の癌モデルザルを開発することを目的とする。さらにTgザルの腫瘍に浸潤するT細胞からTCR遺伝子を単離し、Cre/loxPによるカセット交換法を用いてTCR 遺伝子を iPS細胞の内在性TCR遺伝子座へノックインする。その後、分化誘導したT細胞をTgザルに移植することにより、免疫システム存在下での再生T細胞の治療効果を検討する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでに、レンチウイルスを用いて4つの癌関連遺伝子をカニクイザルの卵に遺伝子導入させた後、MHCホモサル由来の精子を用いて顕微授精を行い、遺伝子導入された胚を仮親へ移植することでトランスジェニック（Tg）カニクイザルの作出に成功している。作出したTgカニクイザルは動物愛護の観点を踏まえ、生後1年6ヶ月以降に解析した。その結果、一部個体においてがん誘導性遺伝子の導入が確認できた。しかしながら、遺伝子導入マーカーとして導入しているGFPとクサビラオレンジ（KO）のうち、GFPの蛍光しか確認できなかった。KOの発現が確認できなかった原因としてトランスジーンのコピー数が少ないことが考えられた。そこでトランスジーンのコピー数を増やすために、遺伝子導入する方法の改善を試みた。ウイルスを用いずにTransposaseにより積極的にゲノムDNAへ遺伝子を挿入できるpiggyBac Transposon ベクターを構築した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
レンチウイルスを用いて作出したTgカニクイザルは、トランスジーンが挿入されているにも関わらず、マーカー遺伝子であるKOが発現していなかった。KOの発現が確認できなかった原因としてトランスジーンのコピー数が少ないことが考えられた。
そのため、トランスジーンのコピー数を増やすために、遺伝子導入方法の改善を試みている。
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| Strategy for Future Research Activity |
レンチウイルスを用いて作出したTgカニクイザルは、トランスジーンが挿入されているにも関わらず、マーカー遺伝子であるKOが発現していなかった。レンチウイルスでは挿入サイズに制限があるため、２つのプラスミドにわけて遺伝子導入を行っている。しかし、Transposaseにより積極的にゲノムDNAへ遺伝子を挿入できる、piggyBac Transposon ベクターであればサイズ制限がないため、このベクターを用いて Tgカニクイザルの作出を試みる。
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