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外部刺激による非対称膜ベシクル内での効率的な酵素逐次反応の実現

Research Project

Project/Area Number 23K23142
Project/Area Number (Other) 22H01874 (2022-2023)
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

Allocation TypeMulti-year Fund (2024)
Single-year Grants (2022-2023)
Section一般
Review Section Basic Section 27040:Biofunction and bioprocess engineering-related
Research InstitutionGunma University

Principal Investigator

神谷 厚輝  群馬大学, 大学院理工学府, 助教 (70612315)

Project Period (FY) 2022-04-01 – 2025-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2024)
Budget Amount *help
¥17,680,000 (Direct Cost: ¥13,600,000、Indirect Cost: ¥4,080,000)
Fiscal Year 2024: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2023: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2022: ¥8,060,000 (Direct Cost: ¥6,200,000、Indirect Cost: ¥1,860,000)
Keywordsリポソーム / 酵素逐次反応 / 膜タンパク質 / タンパク質集積 / 酵素反応 / バイオリアクタ / 膜透過性ペプチド / 無細胞タンパク質発現 / タンパク質 / 人工細胞モデル / 膜透過ペプチド / 人工細胞膜 / 酵素 / 非対称膜ベシクル
Outline of Research at the Start

細胞質内では様々な重要な生命現象が時空間的に制御されている。生命現象を人工細胞膜リポソームで再現し、その生命現象の詳細な理解や創発性を求めた人工細胞モデル構築を目指している。本研究では、化学、生物学、機械工学を駆使し、ベシクル内における酵素の逐次反応の制御を行う。

Outline of Annual Research Achievements

細胞内では様々なタンパク質に相互作用によって生命現象が生じる。細胞内では酵素が近接した状態であるため、シグナル伝達等が迅速に進行する。酵素の近接状態を試験管内で再現し、効率的な酵素反応を目指す。3種類の酵素にそれぞれ配列の異なる1本鎖DNAを結合させ、それらのDNAがハイブリダイゼーションすることで、酵素が近接する。1つの酵素当たりに複数本の一本鎖DNAを化学的に結合させることで、酵素同士がネットワーク的に結合する。溶液に分散した酵素に比べ、DNAで近接させた酵素の方が酵素カスケード反応効率が高くなった。また、RNAaseや相補配列の1本鎖DNAを加えることでネットワークの形成と解離を操り、酵素反応の反応性も操ることができる。
カチオン性やアニオン性のリン脂質を加えたリポソームを作製し、これらのリポソーム内で生じる無細胞タンパク質発現による一連の転写・翻訳の量を蛍光にて観察を行った。他の組成のリポソームにカチオン性リポソーム内では転写量が増大し、miRNA量の継続時間が長かった。このことが、翻訳量に影響した。無細胞タンパク質発現の一連の転写・翻訳を観察することで、タンパク質発現を増大させるための因子特定につながる。
さらに、蛍光タンパク質のN末端やC末端に膜透過性ペプチドを融合させた。膜透過性ペプチドの種類や融合させる末端によってリポソーム内や細胞内へのタンパク質の輸送量が大きく変わることを見出した。
これらの成果は、リポソーム内で効率的に反応を進行させることに資する結果である。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

多くの国際学会、国内学会で発表を行った。さらに、得られた結果をScientific ReportsやAnalytical Chemistryに発表した。

Strategy for Future Research Activity

膜透過性ペプチドを直接蛍光タンパク質に結合させることで、リポソームや細胞内への輸送が上昇した。次年度は、膜透過性ペプチドによるタンパク質の細胞内輸送の原理を考察する。また、蛍光タンパク質以外の他のタンパク質の輸送も試み汎用性の検証を行う。

Report

(2 results)
  • 2023 Annual Research Report
  • 2022 Annual Research Report
  • Research Products

    (54 results)

All 2024 2023 2022 Other

All Journal Article (7 results) (of which Peer Reviewed: 7 results,  Open Access: 3 results) Presentation (45 results) (of which Int'l Joint Research: 7 results,  Invited: 5 results) Remarks (2 results)

  • [Journal Article] Efficiency of transcription and translation of cell-free protein synthesis systems in cell-sized lipid vesicles with changing lipid composition determined by fluorescence measurements2024

    • Author(s)
      Miwa Akari、Wakamori Masatoshi、Ariyoshi Tetsuro、Okada Yasushi、Shirouzu Mikako、Umehara Takashi、Kamiya Koki
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: 14 Issue: 1

    • DOI

      10.1038/s41598-024-53135-8

    • Related Report
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    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Molecular Transportation Conversion of Membrane Tension Using a Mechanosensitive Channel in Asymmetric Lipid?Protein Vesicles2024

    • Author(s)
      Baba Kotaro、Kamiya Koki
    • Journal Title

      ACS Applied Materials & Interfaces

      Volume: 16 Issue: 17 Pages: 21623-21632

    • DOI

      10.1021/acsami.4c02370

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  • [Journal Article] Control of Reversible Formation and Dispersion of the Three Enzyme Networks Integrating DNA Computing2023

    • Author(s)
      Mameuda Aoi、Takinoue Masahiro、Kamiya Koki
    • Journal Title

      Analytical Chemistry

      Volume: 95 Issue: 25 Pages: 9548-9554

    • DOI

      10.1021/acs.analchem.3c00924

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  • [Journal Article] Function Investigations and Applications of Membrane Proteins on Artificial Lipid Membranes2023

    • Author(s)
      Tosaka Toshiyuki、Kamiya Koki
    • Journal Title

      International Journal of Molecular Sciences

      Volume: 24 Issue: 8 Pages: 7231-7231

    • DOI

      10.3390/ijms24087231

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  • [Journal Article] Cell-sized asymmetric phospholipid-amphiphilic protein vesicles with growth, fission, and molecule transportation2023

    • Author(s)
      Suzuki Masato、Kamiya Koki
    • Journal Title

      iScience

      Volume: 26 Issue: 3 Pages: 106086-106086

    • DOI

      10.1016/j.isci.2023.106086

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  • [Journal Article] Cu(II)-Triggered Ion Channel Properties of a 2,2′-Bipyridine-Modified Amphotericin B2023

    • Author(s)
      Komaki Kosuke、Kasuya Soichiro、Toda Yusei、Tosaka Toshiyuki、Kamiya Koki、Koshiyama Tomomi
    • Journal Title

      ACS Applied Bio Materials

      Volume: 6 Issue: 2 Pages: 828-835

    • DOI

      10.1021/acsabm.2c00995

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  • [Journal Article] Control of Enzyme Reaction Initiation inside Giant Unilamellar Vesicles by the Cell-Penetrating Peptide-Mediated Translocation of Cargo Proteins2022

    • Author(s)
      Miwa Akari、Kamiya Koki
    • Journal Title

      ACS Synthetic Biology

      Volume: 11 Issue: 11 Pages: 3836-3846

    • DOI

      10.1021/acssynbio.2c00413

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  • [Presentation] 生体分子集積による外部刺激応答型人工生命システムの構築2024

    • Author(s)
      神谷厚輝
    • Organizer
      第7回分子ロボティクス年次大会
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  • [Presentation] PROTEIN ACCUMULATION AND MEMBRANE MODIFICATION USING ASYMMETRIC PHOSPHOLIPID-PROTEIN VESICLES2024

    • Author(s)
      Msato Suzuki, Koki Kamiya
    • Organizer
      2024 Biophysical Society Annual Meeting
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  • [Presentation] THE FUNCTION OF MECHANOSENSITIVE CHANNELS IN THE ASYMMETRIC LIPID-PROTEIN MEMBRANE2024

    • Author(s)
      Kotaro Baba, Koki Kamiya
    • Organizer
      2024 Biophysical Society Annual Meeting
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      Koki Kamiya, Aoi Mameuda
    • Organizer
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    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 膜透過性ペプチドを介したタンパク質膜透過におけるペプチド-タ ンパク質間の相互作用の検討2024

    • Author(s)
      三輪明星、神谷厚輝
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      第17回バイオ関連化学シンポジウム
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  • [Presentation] 外部刺激に応答した小胞の分裂と内膜上への酵素集積システムの構築2024

    • Author(s)
      鈴木允人、神谷厚輝
    • Organizer
      第7回分子ロボティクス年次大会
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  • [Presentation] 両親媒性タンパク質膜による小胞膜上でのタンパク質集積2024

    • Author(s)
      鈴木允人、神谷厚輝
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  • [Presentation] 外部刺激に応答したリポソームの非対称膜形成制御システムの開発とタンパク質集積への応用2024

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      李水民、神谷厚輝
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      日本化学会第104春季年会
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  • [Presentation] 両親媒性タンパク質を用いた脂質混在膜の作製2024

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      長井佑樹、神谷厚輝
    • Organizer
      日本化学会第104春季年会
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  • [Presentation] 無細胞タンパク質発現系で発現させた結晶化タンパク質の結晶化の検討2024

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      小菅友萌、神谷厚輝
    • Organizer
      日本化学会第104春季年会
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  • [Presentation] 外部刺激応答による酵素の近接と反応効率の検討2024

    • Author(s)
      高沢桃花、神谷厚輝
    • Organizer
      日本化学会第104春季年会
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  • [Presentation] リポソームへの生体分子集積による人工細胞システムの構築2023

    • Author(s)
      神谷厚輝
    • Organizer
      第17回東北糖鎖研究会
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  • [Presentation] 外部刺激によるリポソームの非対称膜形成の制御と生命機能変換2023

    • Author(s)
      李水民、神谷厚輝
    • Organizer
      第17回バイオ関連化学シンポジウム
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  • [Presentation] リポソーム膜透過のためのタンパク質-膜透過性ペプチドの融合と評価2023

    • Author(s)
      三輪明星、神谷厚輝
    • Organizer
      「細胞を創る」研究会 16.0
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  • [Presentation] 外部刺激によるリポソームの非対称膜形成とタンパク質集積の制御2023

    • Author(s)
      李水民、神谷厚輝
    • Organizer
      「細胞を創る」研究会 16.0
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  • [Presentation] 脂質-タンパク質非対称膜小胞を用いたタンパク質集積と膜の性質改変2023

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      鈴木允人、神谷厚輝
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      「細胞を創る」研究会 16.0
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  • [Presentation] リポソーム内へのタンパク質輸送のための膜透過性ペプチド融合位置の検討2023

    • Author(s)
      三輪明星、神谷厚輝
    • Organizer
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  • [Presentation] 外部刺激によるリポソームの非対称膜形成制御システムの構築2023

    • Author(s)
      李水民、神谷厚輝
    • Organizer
      第13回 CSJ化学フェスタ2023
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      李水民、神谷厚輝
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      鈴木允人、神谷厚輝
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      第61回生物物理学会年会
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      第61回生物物理学会年会
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      李水民、神谷厚輝
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      Koki Kamiya and Masato Suzuki
    • Organizer
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  • [Presentation] CELL PENETRATING PEPTIDES FACILITATE PROTEIN TRANSPORT INTO THE CELL-SIZED ASYMMETRIC LIPID VESICLES AT ARBITRARY TIMING2023

    • Author(s)
      Akari Miwa, Koki Kamiya
    • Organizer
      67th Biophysical Society Annual Meeting
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    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 人工遺伝子回路を搭載したリポソーム内でのホスホリパーゼDの発現2023

    • Author(s)
      李水民、神谷厚輝
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    • Author(s)
      馬塲康太朗、神谷厚輝
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      日本化学会第103春季年会
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  • [Presentation] 膜透過性ペプチド-タンパク質複合体によるリポソーム内へのタンパク質の輸送2023

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      三輪明星、神谷厚輝
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  • [Presentation] Functionalized lipid membranes for creating well-defined artificial cell models2022

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      Koki Kamiya
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    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] 生体分子の再構成による人工細胞膜の機能化2022

    • Author(s)
      神谷厚輝
    • Organizer
      立命館大学「生体膜・脂質研究の最前線」シンポジウム
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  • [Presentation] 人工細胞膜への生体分子集積による機能発現2022

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    • Author(s)
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    • Organizer
      The 26th International Conference on Miniaturized Systems for Chemistry and Life Sciences
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  • [Presentation] 膜透過性ペプチドを用いた非対称膜リポソーム内へのタンパク質輸送2022

    • Author(s)
      三輪明星、神谷厚輝
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      化学とマイクロ・ナノシステム学会 第45回研究会(CHEMINAS 45)
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  • [Presentation] リン脂質-タンパク質非対称膜小胞を用いた小胞分裂モデルの構築2022

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      鈴木允人、神谷厚輝
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  • [Presentation] 三輪明星、神谷厚輝2022

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      鈴木允人、神谷厚輝
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      三輪明星、神谷厚輝
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      細胞を創る研究会 15.0
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      馬塲康太朗、神谷厚輝
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      細胞を創る研究会 15.0
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      鈴木允人、神谷厚輝
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      三輪明星、神谷厚輝
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      http://kamiya.chem-bio.st.gunma-u.ac.jp/index2.html

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Published: 2022-04-19   Modified: 2024-12-25  

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