| Project/Area Number |
23K24590
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| Project/Area Number (Other) |
22H03332 (2022-2023)
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Allocation Type | Multi-year Fund (2024)
Single-year Grants (2022-2023) |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 58020:Hygiene and public health-related: including laboratory approach
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
兒島 憲二 静岡県立大学, 薬学部, 准教授 (40542759)
吉宗 一晃 日本大学, 生産工学部, 教授 (50325700)
柳原 格 地方独立行政法人大阪府立病院機構大阪母子医療センター(研究所), 免疫部門, 部長 (60314415)
滝田 禎亮 京都大学, 農学研究科, 助教 (70263126)
藤原 伸介 関西学院大学, 生命環境学部, 教授 (90263219)
福田 青郎 関西学院大学, 生命環境学部, 研究員 (30421283)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2025-03-31
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥17,290,000 (Direct Cost: ¥13,300,000、Indirect Cost: ¥3,990,000)
Fiscal Year 2024: ¥4,810,000 (Direct Cost: ¥3,700,000、Indirect Cost: ¥1,110,000)
Fiscal Year 2023: ¥6,500,000 (Direct Cost: ¥5,000,000、Indirect Cost: ¥1,500,000)
Fiscal Year 2022: ¥5,980,000 (Direct Cost: ¥4,600,000、Indirect Cost: ¥1,380,000)
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| Keywords | 等温核酸増幅法 / リコンビナーゼポリメラーゼ増幅法 / ピルビン酸キナーゼ / 鎖置換DNAポリメラーゼ / リコンビナーゼ / uvsY / 一本鎖DNA結合タンパク質 / ATP再生酵素 / 鎖置換DNAポリメ ラーゼ |
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| Outline of Research at the Start |
基礎の展開としては、作製した高機能タンパク質・酵素のX線結晶構造解析を行い、野生型と立体構造を比較し、各タンパク質・酵素の高機能化の構造的要因を明らかにする。応用展開としては、最も高性能なタンパク質・酵素を使用し、長期間の常温保存が可能なRPA試薬を開発し、新型コロナウイルスを含めた病原体の現場での迅速な検出を実現させる。
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| Outline of Final Research Achievements |
The objective was to develop enzymes used in the recombinase polymerase amplification method (RPA). The freeze-dried reagent using the thermophilic ATP regeneration enzyme Thermotoga maritima pyruvate kinase had longer storage stability than the conventional rabbit creatine kinase. The freeze-dried reagent using DNA polymerase (Pol) from the thermophilic bacterium Aeribacillus pallidus exhibited longer storage stability than that using Pol from the conventional Bacillus stearothermophilus. A library was created to increase the solubility of the recombinase uvsY, and soluble variants were selected.
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| Academic Significance and Societal Importance of the Research Achievements |
等温核酸増幅法であるリコンビナーゼポリメラーゼ増幅法（RPA法）は、PCRと異なり温度の上げ下げが不要なため、後進国あるいは現場での病原体の検出に最適と注目されている。これを実現させるためには、室温での試薬保存を可能とする安定な酵素が必要である。本研究では、従来RPA法で使用されてきたATP再生酵素とDNAポリメラーゼを好熱性の新規な酵素に代替することにより、凍結乾燥試薬の室温での長期保存を可能とした。今後、ドイツの１企業が、本成果をもとに社会実装に向けたRPA試薬の開発を行う。
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