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新規極性評価法によるマクロファージ分極と生体材料特性の相関解明

Research Project

Project/Area Number 23K25204
Project/Area Number (Other) 22H03950 (2022-2023)
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

Allocation TypeMulti-year Fund (2024)
Single-year Grants (2022-2023)
Section一般
Review Section Basic Section 90120:Biomaterials-related
Research InstitutionToyo University (2024)
Tokyo Medical and Dental University (2022-2023)

Principal Investigator

木村 剛  東洋大学, 生命科学部, 教授 (10393216)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 野村 渉  広島大学, 医系科学研究科(薬), 教授 (80463909)
Project Period (FY) 2022-04-01 – 2026-03-31
Project Status Granted (Fiscal Year 2024)
Budget Amount *help
¥17,290,000 (Direct Cost: ¥13,300,000、Indirect Cost: ¥3,990,000)
Fiscal Year 2025: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2024: ¥3,770,000 (Direct Cost: ¥2,900,000、Indirect Cost: ¥870,000)
Fiscal Year 2023: ¥3,770,000 (Direct Cost: ¥2,900,000、Indirect Cost: ¥870,000)
Fiscal Year 2022: ¥5,590,000 (Direct Cost: ¥4,300,000、Indirect Cost: ¥1,290,000)
Keywordsマクロファージ / 生体材料 / 免疫反応 / ゲノム編集 / ゲンム編集
Outline of Research at the Start

生体材料研究においてマクロファージの極性(炎症性・抗炎症性)や集合が重要と考えられている。本研究課題の目的は、生きたマクロファージの極性評価系を確立し、生体材料特性との相関を解明することである。ゲノム編集技術を用いた相同組換えにより極性マーカーに発光タグを挿入したマクロファージを作製し、生きたマクロファージの極性を経時的に計測する評価系を確立する。マイクロからメソの種々のスケールのマクロファージの生体材料に対する応答を調査し、材料特性との関係を明らかにする。
本研究は、新たな評価系の開発によりマクロファージの極性・集合に関する知見と生体材料の設計指針を提供できる可能性を有する。

Outline of Annual Research Achievements

免疫調節のキープロセスの一つは炎症と抗炎症の調節であり、その制御が重要となる。近年、炎症・抗炎症調節にマクロファージの性質や動態が強く関連していることが明らかとなり注目されている。本研究課題では、生きたマクロファージの極性評価系を確立し、生体材料特性との相関を解明することを目的としている。これを実現するため、(A)遺伝子改変マクロファージの作製、(B)マクロファージ集合体の作製と分極評価、(C)マクロファージ極性を指標とした生体材料評価の研究項目について研究を計画している。(A)について、炎症性(M1)、抗炎症性(M2)極性マーカー遺伝子を選択し、それら遺伝子の下流に発光タグを挿入した遺伝子改変マクロファージの作製を検討した。マクロファージ(THP-1, J774A.1)のM1マーカー遺伝子(IL-1b, TNFa)への発光タグの挿入に成功した。また、マクロファージ(THP-1)のM2マーカー遺伝子(IL-10)への発光タグの挿入に成功した。M1分極誘導による発光強度の増加が示され、発光強度がM1分極の指標となることが明らかとなった。(B)について、マクロファージの集合体、微粒子にマクロファージを担持させた集合体の作製についてマイクロからメソスケールの異なるスケールでの作製を検討し、サイズの制御が可能となった。(C)について、脱細胞化生体組織および種々の合成高分子材料に遺伝子改変マクロファージを播種し、M1分極を発光測定により評価した。脱細胞化組織では低発光強度であり、一方の合成高分子材料では比較的高い発光強度が示され、また、各材料における経時的変化に差異が示された。遺伝子改変マクロファージを用いて材料のM1分極性を評価することが可能となった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

本研究では、生きたマクロファージの極性評価系を確立し、生体材料特性との相関を解明することを目指している。これを実現するため、(A)遺伝子改変マクロファージの作製、(B)マクロファージ集合体の作製と分極評価、(C)マクロファージ極性を指標とした生体材料評価の研究項目について研究を実施する。当該年度は、(A)THP-1、J774A.1細胞を用いた遺伝子改変マクロファージの作製、(B)マクロファージ集合体のサイズ制御、(3)各種材料上でのマクロファージM1分極測定を計画した。(A)については、マクロファージのM1,M2マーカー遺伝子への発光タグの挿入に成功した。特に、M1分極誘導剤の濃度に応じた発光強度の増加を示し、発光タグ挿入マクロファージの発光強度がマクロファージのM1分極の指標となると考えられた。(B)については、サイズの異なるマクロファージ集合体を調製し、サイズによる分極性の違いが明らかとなった。(C)については、材料(脱細胞化組織、合成高分子材料)によりマクロファージのM1,M2分極性およびその極性持続性が異なることが明らかとなった。このことから、遺伝子改変マクロファージを用いて生体材料の初期免疫反応を評価可能と考えられた。上記の研究の成果について、学会等にて発表し、また、論文5報を発表した。以上より、本年度の目的は概ね達成されたと考えている。

Strategy for Future Research Activity

次年度以降の研究の推進方策として、(A)遺伝子改変マクロファージの作製、(B)マクロファージ集合体の作製と分極評価、(C)マクロファージ極性を指標とした生体材料評価の研究項目について研究を引き続き実施する。詳細は以下に記す。
(A)遺伝子改変マクロファージに関して、マクロファージ分極のマーカー遺伝子へ発光タグの挿入を昨年度に引続き行う。マクロファージの種類や分泌物質の影響を考察するため、マクロファージとして、THP-1細胞に加え、J774A.1細胞を用いて遺伝子改変マクロファージの作製を継続する。また、マーカー遺伝子として、M1マーカー遺伝子であるTNFa、M2分極マーカー遺伝子であるTGFbを標的として発光性のHiBiTタグを挿入する。これまでの挿入法に加え他の挿入法を探索し、挿入率を向上させる。さらに、細胞周期マーカーであるFucci遺伝子の挿入を試みる。(B)マクロファージの集合状態と分極性について遺伝子網羅解析にて詳細に検討する。(C)マクロファージ極性を指標とした生体材料評価として、表面自由エネルギー、表面電荷、表面粗さなどの異なる高分子材料、種々に加工した脱細胞化組織を用いて、マクロファージの分極性および極性持続性を検討する。また、金属材料、無機材料のマクロファージの分極性および極性持続性も検討する。

Report

(2 results)
  • 2023 Annual Research Report
  • 2022 Annual Research Report
  • Research Products

    (24 results)

All 2024 2023 2022 Other

All Journal Article (5 results) (of which Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 5 results) Presentation (18 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Effects of Polymeric Materials on Activation of THP-1 Cell-derived Macrophages during Differentiation Induced by PMA2024

    • Author(s)
      TODA Shota、HASHIMOTO Yoshihide、NAKAMURA Naoko、YAMADA Masahiro、NAKAOKA Ryusuke、NOMURA Wataru、YAMAMOTO Masaya、KIMURA Tsuyoshi、KISHIDA Akio
    • Journal Title

      Advanced Biomedical Engineering

      Volume: 13 Issue: 0 Pages: 1-10

    • DOI

      10.14326/abe.13.1

    • ISSN
      2187-5219
    • Related Report
      2023 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Quantification of Decellularization in Hematoxylin and Eosin Stained Images of Decellularized Aorta Using Machine Learning2024

    • Author(s)
      NAKAMURA Naoko、YASUDA Eri、AKIYAMA Shota、HASHIMOTO Yoshihide、KISHIDA Akio、KIMURA Tsuyoshi
    • Journal Title

      Advanced Biomedical Engineering

      Volume: 13 Issue: 0 Pages: 26-34

    • DOI

      10.14326/abe.13.26

    • ISSN
      2187-5219
    • Related Report
      2023 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Evaluation of Proinflammatory Response to Polymeric Materials Using a Macrophage Cell Line Genetically Tagged with a Luminescent Peptide2024

    • Author(s)
      Kimura T, Maeda H, Hagiwara M, Hashimoto Y, Nakamura N, Nomura W, Tanabe T, Kobayashi M, Yamamoto M, Matsushima T, Asahara H, Kishida A
    • Journal Title

      Advanced Biomedical Engineering

      Volume: 13 Issue: 0 Pages: 43-51

    • DOI

      10.14326/abe.13.43

    • ISSN
      2187-5219
    • Related Report
      2023 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Characteristics of macrophage aggregates prepared by rotation culture and their response to polymeric materials2024

    • Author(s)
      Toda Shota、Hashimoto Yoshihide、Nakamura Naoko、Yamada Masahiro、Nakaoka Ryusuke、Nomura Wataru、Yamamoto Masaya、Kimura Tsuyoshi、Kishida Akio
    • Journal Title

      Journal of Artificial Organs

      Volume: - Issue: 4 Pages: 410-418

    • DOI

      10.1007/s10047-023-01428-6

    • Related Report
      2023 Annual Research Report
    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Preparation of Cholesterol-Modified Hyaluronic Acid Nanogel-Based Hydrogel and the Inflammatory Evaluation Using Macrophage-like Cells2023

    • Author(s)
      Kohie Yabuuchi, Mika Suzuki, Chen Liang, Yoshihide Hashimoto, Tsuyoshi Kimura, Kazunari Akiyoshi, Akio Kishida
    • Journal Title

      Gells

      Volume: 9 Issue: 11 Pages: 866-866

    • DOI

      10.3390/gels9110866

    • Related Report
      2023 Annual Research Report
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  • [Presentation] Caco-2/THP-1細胞を用いたマイクロプラスチックに対する炎症応答評価2024

    • Author(s)
      木村剛,梁忱,橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,田邉匡生,中村奈緒子,山本雅哉,岸田晶夫
    • Organizer
      第33回ライフサポート学会フロンティア講演会
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] 脱細胞化組織の無機複合による骨親和性付与2024

    • Author(s)
      木村剛,鈴木美加,橋本良秀, 岡田正弘,松本卓也,高橋宏信, 清水達也, 山田将博,中村奈緒子, 岸田晶夫
    • Organizer
      第23回日本再生医療学会総会
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] 種々の脱細胞化組織に対するマクロファージの応答2024

    • Author(s)
      鈴木美加, 木村剛, Varja cuculuvic, 萩原萌子, 橋本良秀, 山本雅哉, 野村渉, 岸田晶夫
    • Organizer
      第23回日本再生医療学会総会
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] Development of soft-hard interregional tissue using a mineralized dECM membrane2023

    • Author(s)
      Tsuyoshi KIMURA, Mika SUZUKI, Yoshihide HASHIMOTO, Masahiro OKADA, Takuya MATSUMOTO, Naoko NAKAMURA, Akio KISHIDA
    • Organizer
      SFB2023
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      2023 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 腸管モデルを用いた高分子材料の免疫評価2023

    • Author(s)
      木村剛,石垣瑠梨,梁忱,萩原萌子, 橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,中村奈緒子,山本雅哉,木村剛,岸田晶夫
    • Organizer
      第72回高分子学会年次大会
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] 種々の高分子材料に対するマクロファージの炎症応答2023

    • Author(s)
      木村剛,橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,田邉匡夫,中村奈緒子,山本雅哉,岸田晶夫
    • Organizer
      第52回医用高分子シンポジウム
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] Development of soft-hard internal tissue by mineralization of decellularized membrane2023

    • Author(s)
      Tsuyoshi Kimura, Mika Suzuki, Yoshihide Hashimoto, Masahiro Okasa, Takuya Matsumoto, Naoko Nakamura, Akio Kishida
    • Organizer
      Biomaterials Internatioanl 2023
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      2023 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] Evaluation of proinflammatory response to polymeric materials using a macrophage cell line genetically tagged with a luminescent peptide2023

    • Author(s)
      Tsuyoshi Kimura, Hanako Maeda, Moeko Hagiwara, Yoshihide Hashimoto, Naoko Nakamura, Wataru Nomura, Tadao Tanabe, Mako Kobayashi, Masaya Yamamoto, Takahide Matsushima, Hiroshi Asahara, Akio Kishida
    • Organizer
      生体医工学シンポジウム2023
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] マイクロ・ナノプラスチック対する免疫応答を評価するための腸管モデルの構築2023

    • Author(s)
      梁忱,木村剛,萩原萌子, 橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,田邉匡生,中村奈緒子,山本雅哉,岸田晶夫
    • Organizer
      第72回高分子討論会
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] マクロファージ凝集体の分極特性と高分子材料に対する応答2023

    • Author(s)
      戸田翔太,橋本良秀,野村渉,木村剛,岸田晶夫
    • Organizer
      第45回日本バイオマテリアル学会大会
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] 硬-軟境界組織応用を目指した石灰化dECM膜のin vivo骨親和性評価2023

    • Author(s)
      鈴木美加,木村剛,橋本良秀,岡田正弘,松本卓也,高橋宏信,清水達也,山田将博,江草宏,中村奈緒子,岸田晶夫
    • Organizer
      第45回日本バイオマテリアル学会大会
    • Related Report
      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] Evaluation of biological response to materials using intestinal epithelial cells and macrophages2023

    • Author(s)
      Tsuyoshi Kimura, Chen Liang, Mika Suzuki, Yoshihide Hashimoto, Tadao Tanabe, Masaya Yamamoto, Akio Kishida
    • Organizer
      PRICM11
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      2023 Annual Research Report
  • [Presentation] Evaluation of Microplastics using Caco-2/THP-1 Co-culture2023

    • Author(s)
      Liang Chen, Moeko Hagiwara, Yoshihide Hashimoto, Takahide Matsushima, Hiroshi Asahara, Wataru Nomura, Naoko Nakamura, Tasuro Goda, Masaya Mamamoto, Tsuyoshi Kimura, Akio Kishida
    • Organizer
      MRM2023/IUMRS-ICA2023
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      2023 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 合成高分子材料と脱細胞化組織のマクロファージ応答に関する研究2023

    • Author(s)
      石垣瑠梨,萩原萌子, 橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,中村奈緒子,山本雅哉,木村剛,岸田晶夫
    • Organizer
      ライフサポート学会第32回フロンティア講演会
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      2022 Annual Research Report
  • [Presentation] デザイナー細胞を用いた高分子材料の免疫評価2022

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      木村剛,戸田翔太,石垣瑠梨,橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,中村奈緒子, 山本雅哉, 岸田晶夫
    • Organizer
      第71回高分子学会年次大会
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      2022 Annual Research Report
  • [Presentation] 種々の高分子材料に対するマクロファージ免疫応答評価2022

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      石垣瑠梨,木村剛,橋本良秀,松島隆英,浅原弘嗣,野村渉,中村奈緒子, 山本雅哉, 岸田晶夫
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  • [Presentation] 歯根膜としての応用を目指した片面石灰化dECM膜の調製2022

    • Author(s)
      鈴木美加,木村剛 ,岡田正弘,中村奈緒子,岸田晶夫
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  • [Presentation] 細胞形状によるマクロファージの分極評価法の開発2022

    • Author(s)
      樋口亮平,木村剛,中村奈緒子
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      2022 Annual Research Report
  • [Remarks] 東京医科歯科大学生体材料工学研究所物質医工学分野

    • URL

      http://www.labonet.info/kishida/

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      2022 Annual Research Report

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Published: 2022-04-19   Modified: 2024-12-25  

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