高感度質量分析法による皮膚疾患バイオマーカーの網羅的探索

• Project/Area Number: 24591628
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Dermatology
• Research Institution: Ehime University
• Principal Investigator: 橋本 公二 愛媛大学, 先端研究・学術推進機構学術企画室, 特命教授 (00110784)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2014-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2012)
• Budget Amount: ¥5,460,000 (Direct Cost: ¥4,200,000、Indirect Cost: ¥1,260,000); Fiscal Year 2014: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2013: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2012: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000)
• Keywords: バイオマーカー / 尋常性乾癬 / アトピー性皮膚炎 / プロテオミクス解析

Research Abstract

本研究の目的は、尋常性乾癬の新たなバイオマーカーを、高感度質量分析法を用いて網羅的に検索し、乾癬の診断、重症度、薬剤の効果判定に用いることである。また同様のストラテジーで湿疹の代表的疾患であるアトピー性皮膚炎においてもバイオマーカー探索を行い、診断、重症度、薬剤の効果判定に有用であることを示す。 本年度は書面にて同意の得られた患者さんから血液を3ml採取し、血清分離後凍結保存を行った。同時に尿、汗も回収し(3ml)凍結保存した 。対照として健常人のサンプルの収集を開始した。目標症例各疾患50例、正常人50例のうちアトピー性皮膚炎5例、尋常性乾癬2例、正常人12例のサンプルを回収することができた。安定同位体で標識した各疾患特異的ヒトタンパク質ライフブラリーの構築 コムギ胚芽インビトロタンパク質合成技術を用いて、同位体標識タンパク質ライブラリーの作成を行った。膜貫通型タンパク質の合成 には、リポソームを利用する無細胞タンパク質合成技術を用い、同位体標識タンパク質の作成には、安定同位体で標識したL-アミノ酸 リジン(L-Lys-13C615N2)とアルギニン(L-Arg-13C615N4)を使用した。全ての合成タンパク質はTIPsタグにより濃度を500 fmol/μl に補正した後、低吸着マイクロチューブへ分注し、内部標準用試料として-80度で保存・管理を行った。SIRPL基本ライブラリー用合成候補としてインターロイキンおよびその受容体、インターフェロンおよびその受容体、ケモカインおよびその受容体、その他のサイトカインおよびその受容体、造血因子およびその受容体、細胞傷害因子およびその受容体、細胞増殖因子およびその受容体、ADAMメタロプロテアーゼ、MT-MMPおよびMPメタロプロテアーゼとその阻害因子TIMP、オーファン受容体も含む各種GPCR、細胞外マトリックス、がん遺伝子、がん抑制遺伝子など約800種類を目標とし合成を開始している。

Research Products

• [Journal Article] Eccrine sweat contains IL-1α, IL-1β and IL-31 and activates epidermal keratinocytes as a danger signal. (2013)
  • Author(s): Dai X, Okazaki H, Hanakawa Y, Murakami M, Tohyama M, Shirakata Y, Sayama K.
  • Journal Title: PLoS One. Volume: ８ Issue: 7 Pages: 1-8
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0067666
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] High Frequency of HLA B62 in Fulminant Type 1 Diabetes with the Drug-Induced Hypersensitivity Syndrome (2012)
  • Author(s): Hiroshi Onuma, et. al.,
  • Journal Title: J Clin Endocrinol Metab Volume: 97 Issue: 12 Pages: E2277-E2281
  • DOI: 10.1210/jc.2012-2054
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Immunological mechanisms of epidermal damage in toxic epidermal necrolysis. (2012)
  • Author(s): Tohyama M, Hashimoto K
  • Journal Title: Curr Opin Allergy Clin Immunol. Volume: 12 Issue: 4 Pages: 376-82
  • DOI: 10.1097/aci.0b013e328355b865
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Cell surface-annexins regulate ADAM-mediated ectodomain shedding of pro-amphiregulin (2012)
  • Author(s): Hironao Nakayama
  • Journal Title: Molecular Biology of the Cell Volume: (印刷中) Issue: 10 Pages: 1964-1975
  • DOI: 10.1091/mbc.e11-08-0683
  • Peer Reviewed