細胞内クロランドイオン制御による新規胃癌腹膜播種性転移治療法の開発

• Project/Area Number: 24591957
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Digestive surgery
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 國場 幸均 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (20205363)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大辻 英吾 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (20244600) ; 塩崎 敦 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (40568086)
• Project Period (FY): 2012
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2012)
• Budget Amount: ¥5,330,000 (Direct Cost: ¥4,100,000、Indirect Cost: ¥1,230,000); Fiscal Year 2014: ¥1,950,000 (Direct Cost: ¥1,500,000、Indirect Cost: ¥450,000); Fiscal Year 2013: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2012: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
• Keywords: 胃癌 / 食道癌 / 細胞内クロライド / NKCC

Research Abstract

上部消化管癌細胞株における細胞内Cl^-による遊走能制御機構解析、細胞殊・組織におけるNa^+/K^+/2Cl^-共輸送体(NKCC)発現解析を試みた。
胃癌細胞株(MKN28)を低Cl^-培地で培養すると、細胞外Cl^-依存性に細胞内Cl^-濃度が低下することが、Cl^-感受性蛍光色素を用いた解析により確認された。また低Cl^-培地下に培養すると、細胞遊走能が有意に低下することが確認された。マイクロアレイでは、細胞内Cl^-の低下に伴い、511遺伝子のmRNA発現の増加と、170遺伝子のmRNA発現の減少を認めた。INGENUITYによるシグナル経路解析では、Top Bio Functionとして、"Cellular Movement"がランクされた。また、Top Networkとして、MEK、ID1、ID3を中心とした細胞増殖制御経路、PDCD4、TGFb,TNFAIP3、TNFRSF9、IL6、IL12、MMP9を中心とする細胞運動制御経路が明らかになり、定量的RT-PCRにおいてMMP9、ID1の低下、CCRL1の上昇を確認した。
また、食道癌細胞株6種におけるNKCC1の発現解析では、定量的RT-PCRで全種Western blottingで4種にNKCC1の発現を認めた。NKCC1高発現株(KYSE170)にsiRNAをトランスフェクションしたところ、細胞増殖抑制効果とG2 arrest効果を確認した。またNKCC1をknockdown後、マイクロアレイ解析を行ったところ、1474遺伝子のmRNA発現の増加と1807遺伝子の減少を認め、シグナル経路解析ではTop Bio FunctionとしてG2/M DNA Damage Checkpoint Regulationがランクされた。食道癌検体68例を用いた免疫染色では低分化型扁平上皮癌においてNKCC1発現が高い傾向を認めた。
これらの結果より、細胞内Cl^-がmigrationに関連した多くの遺伝子発現を制御する可能性、細胞内Cl^-を制御するNKCC1の発現が上部消化管癌細胞において重要な役割を果たしている可能性が示唆された。

Research Products

• [Journal Article] Perioperative outcomes of esophagectomy preceded by the laparoscopic transhiatal approach for esophageal cancer. (2012)
  • Author(s): Shiozaki A, Kokuba Y, Otsuji E, et al.
  • Journal Title: Diseases of the Esophagus Volume: (印刷中) Issue: 5 Pages: 470-478
  • DOI: 10.1111/j.1442-2050.2012.01439.x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Risk factors for postoperative respiratory complications following esophageal cancer resection (2012)
  • Author(s): Shiozaki A, Fujiwara H, Otsuji E, et al
  • Journal Title: Oncol Lett Volume: 3 Pages: 907-912
  • DOI: 10.3892/ol.2012.589
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] PSK induces apoptosis through the inhibition of activated STAT3 in human esophageal carcinoma cells (2012)
  • Author(s): Umehara S, Shiozaki A, Otsuji E, et al
  • Journal Title: Int J Oncol Volume: 41 Pages: 61-66
  • DOI: 10.3892/ijo.2012.1454
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Predictive factors for early recurrence in patients with esophageal squamous cell carcinoma after curative esophagectomy. (2012)
  • Author(s): Shimizu H, Shiozaki A, Kokuba Y, Otsuji E, et al.
  • Journal Title: Esophagus Volume: 9 Issue: 1 Pages: 17-24
  • DOI: 10.1007/s10388-011-0308-2
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Ki-67 labeling index as an independent prognostic factor in human esophageal squamous cell carcinoma. (2012)
  • Author(s): Sasagawa H, Shiozaki A, Iitaka D, Ichikawa D, Komatsu S, Fujiwara H, Okamoto K, Nakashima S, Kinoshita O, Murayama Y, Kuriu Y, Ikoma H, Nakanishi M, Ochiai T, Kokuba Y, Otsuji E.
  • Journal Title: Esophagus Volume: 9 Issue: 4 Pages: 195-202
  • DOI: 10.1007/s10388-012-0336-6
  • NAID: 40019542034
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Spontaneous rupture of the esophagus with extensive bowel necrosis caused by nonocclusive mesenteric ischemia : report of a case. (2012)
  • Author(s): Nakashima S, Shiozaki A, Kokuba Y, Otsuji E, et al.
  • Journal Title: Surgery Today Volume: 42 Issue: 11 Pages: 1107-1110
  • DOI: 10.1007/s00595-012-0195-8
  • NAID: 10031120777
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A case of a superficial carcinoma of the esophagus with isolated lymph node metastasis around the abdominal aorta. (2012)
  • Author(s): Hatakeyama T, Shiozaki A, Kokuba Y, Otsuji E, et al.
  • Journal Title: Surgery Today Volume: 42 Issue: 7 Pages: 676-680
  • DOI: 10.1007/s00595-012-0148-2
  • NAID: 10030788344
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Intrathoracic supercharge technique for esophageal reconstruction using colon interposition via a retrosternal route (2012)
  • Author(s): Hino H, Shiozaki A, Kokuba Y, Otsuji E, et al.
  • Journal Title: Esophagus Volume: 9 Issue: 4 Pages: 234-238
  • DOI: 10.1007/s10388-012-0323-y
  • NAID: 40019542123
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A case involving long-term survival after esophageal cancer with liver and lung metastases treated by multidisciplinary therapy : report of a case. (2012)
  • Author(s): Iitaka D, Shiozaki A, Kokuba Y, Otsuji E, et al.
  • Journal Title: Surgery Today Volume: (印刷中) Issue: 5 Pages: 556-561
  • DOI: 10.1007/s00595-012-0240-7
  • NAID: 10031168053
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 腹腔鏡下大腸手術における安全なReduced Port Surgery. (2012)
  • Author(s): 國場幸均、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第6回単孔式内視鏡手術研究会
  • Place of Presentation: 札幌
• [Presentation] 胃癌細胞における細胞内Cl-を介した遺伝子発現制御機構の解明. (2012)
  • Author(s): 北川真希、塩崎敦、國場幸均、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 腫瘍進展におけるClaudin-1の意義 : TNF-αのメディエーターとしての可能性. (2012)
  • Author(s): 清水浩紀、塩崎敦、國場幸均、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 食道扁平上皮癌手術症例における新規アダプター蛋白XB130の発現解析. (2012)
  • Author(s): 中島慎吾、塩崎敦、國場幸均、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 食道扁平上皮癌(ESCC)腫瘍増殖に関わるXCTの役割と意義について. (2012)
  • Author(s): 飯高大介、塩崎敦、國場幸均、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 大腸癌肝転移症例に対する肝切除周術期化学療法の成績. (2012)
  • Author(s): 中西正芳、國場幸均、塩崎敦、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 5-ALAを用いた胃癌・大腸癌に対する腹膜播種診断の有用性について. (2012)
  • Author(s): 村山康利、國場幸均、塩崎敦、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 当院におけるpStage III大腸癌に対する腹腔鏡下手術の妥当性に関する検討. (2012)
  • Author(s): 竹本健一、國場幸均、塩崎敦、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] Stage IV大腸癌に対する腹腔鏡下大腸切除術の術後短期成績-開腹Stage IV大腸癌および腹腔鏡下Stage O-III大腸癌との比較検討- (2012)
  • Author(s): 栗生宜明、國場幸均、塩崎敦、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)
• [Presentation] 当院における局所進行直腸癌に対する術前化学放射線療法の検討. (2012)
  • Author(s): 西村真澄、國場幸均、塩崎敦、大辻英吾, ら
  • Organizer: 第112回日本外科学会定期学術集会
  • Place of Presentation: 千葉(幕張)