Ｓｏｘ９を活性化する薬剤を用いた軟骨欠損・変性疾患に対する治療法の開発

• Project/Area Number: 24592259
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Orthopaedic surgery
• Research Institution: Nagoya University
• Principal Investigator: 金子 浩史 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 寄附講座助教 (60566975)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鬼頭 浩史 名古屋大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40291174)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2014-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2012)
• Budget Amount: ¥5,330,000 (Direct Cost: ¥4,100,000、Indirect Cost: ¥1,230,000); Fiscal Year 2014: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2013: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2012: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
• Keywords: SOX9 / 軟骨細胞 / 薬効スクリーニング / 軟骨再生 / プロモーター / ルシフェラーゼ / 変形性関節症 / プロテオグリカン / オフラベル治療薬 / 細胞培養

Research Abstract

SOX9は軟骨基質の形質維持に極めて重要であり、SOX9の発現を促進することにより軟骨変性の防止あるいは変性軟骨の修復が期待できる。
マウス軟骨前駆細胞株ATDC5にSOX9プロモーター領域を挿入したベクターをトランスフェクションし定常発現株を作成した。ATDC5はインスリン添加により未分化間葉系細胞から軟骨細胞へ分化することが知られている。作成した定常発現株も通常のATDC5と同様にインスリン添加により軟骨多段階分化モデルが作成できることを確認した。
SOX9を活性化する薬剤を同定する目的で1200種類のスクリーニング用薬剤（Prestwick Chemical社）を用いたルシフェラーゼアッセイによる薬効1次スクリーニングを行い候補薬剤を48種類に絞り、2次にて16薬剤、さらに3次にて濃度依存性を認めた4薬剤に絞った。4次スクリーニングとして、正常ATDC5に4薬剤を添加し、定量的RT-PCR 法によりSOX9およびその下流に位置するII型コラーゲンおよびアグリカンのmRNA 発現を検討した。また、軟骨のプロテオグリカンを評価するためアルシアンブルー染色を行い、吸光度測定により定量化した。その結果、抗アレルギー剤Xがコントロール（ジメチルスルホキシドのみ添加）と比較して10～100μMの範囲で濃度依存性にSOX9、II型コラーゲンおよびアグリカンのmRNAを上昇させ、さらにプロテオグリカン含有量を増加させていた。

Research Products

• [Journal Article] Long-term outcome of gradual reduction using overhead traction for developmental dysplasia of the hip over 6 months of age. (2013)
  • Author(s): Kaneko H, Kitoh H, Mishima K, Matsushita M, Ishiguro N.
  • Journal Title: J Pediatr Orthop. Volume: 33(6) Issue: 6 Pages: 628-34
  • DOI: 10.1097/bpo.0b013e31829b2d8b
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A comparative study of blade plate fixation and external fixation in osteotomies for slipped capital femoral epiphysis. (2013)
  • Author(s): Kitoh H, Kitakoji T, Hattori T, Kaneko H, Mishima K, Matsushita M, Ishiguro N.
  • Journal Title: J Pediatr Orthop B. Volume: 22(6) Issue: 6 Pages: 542-7
  • DOI: 10.1097/bpb.0b013e3283637070
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Perhexiline maleate in the treatment of fibrodysplasia ossificans progressiva: an open-labeled clinical trial. (2013)
  • Author(s): Kitoh H, Achiwa M, Kaneko H, Mishima K, Matsushita M, Kadono I, Horowitz JD, Sallustio BC, Ohno K, Ishiguro N.
  • Journal Title: Orphanet J Rare Dis. Volume: 8 Issue: 1 Pages: 163-163
  • DOI: 10.1186/1750-1172-8-163
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A novel SOX9 H169Q mutation in a family with overlapping phenotype of mild campomelic dysplasia and small patella syndrome (2013)
  • Author(s): Matsushita M, Kitoh H, Kaneko H, Mishima K, Kadono I, Ishiguro N, Nishmura G
  • Journal Title: Am J Med Genet A Volume: 161 Issue: 10 Pages: 2528-2534
  • DOI: 10.1002/ajmg.a.36134
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Meclozine facilitates proliferation and differentiation of chondrocytes by attenuating abnormally activated FGFR3 signaling in achondroplasia. (2013)
  • Author(s): Matsushita, M., Kitoh, H., Ohkawara, B., Mishima, K., Kaneko, H., Ito, M., Masuda, A., Ishiguro, N. and Ohno, K.
  • Journal Title: PLOS ONE Volume: 8(12) Issue: 12 Pages: 81569-81569
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0081569
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Prognostic factors for trochanteric overgrowth after containment treatment in Legg-Calvé-Perthes disease. (2013)
  • Author(s): Kitoh H, Kaneko H, Mishima K, Matsushita M, Ishiguro N
  • Journal Title: J Pediatr Orthop B Volume: 22 Issue: 5 Pages: 432-436
  • DOI: 10.1097/bpb.0b013e32835f585b
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A novel in-frame deletion of the RUNX2 gene causes a classic form of cleidocranial dysplasia (2013)
  • Author(s): Mastushita M., Kitoh H., Kaneko H., Mishima K., Itoh Y., Tokita Y., Ishiguro N.
  • Journal Title: J Bone Miner Metab Volume: 未定 Issue: 1 Pages: 96-99
  • DOI: 10.1007/s00774-013-0456-7
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Isolated bifid rib: Clinical and radiological findings in children. (2012)
  • Author(s): Kaneko H, Kitoh H, Mabuchi A, Mishima K, Matsushita M, Ishiguro N.
  • Journal Title: Pediatr Int Volume: 54 Issue: 6 Pages: 820-823
  • DOI: 10.1111/j.1442-200x.2012.03672.x
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 1歳6か月以降に診断された股関節脱臼に対する治療成績. (2012)
  • Author(s): 金子浩史、鬼頭浩史、馬渕晃好、三島健一、松下雅樹、石黒直樹、岩田浩志、北小路隆彦、服部義
  • Journal Title: 日本小児整形外科学会雑誌 Volume: 21 Pages: 247-250
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Long-term outcome of gradual reduction with overhead traction for developmental dysplasia of the hip in children over six months of age. (2013)
  • Author(s): Kaneko H, Kitoh H, Mishima K, Matsushita M, Ishiguro N.
  • Organizer: 2013 POSNA Annual Meeting
  • Place of Presentation: Toronto, Canada
• [Presentation] A novel SOX9 H169Q mutation in a family with overlapping phenotype of mild campomelic dysplasia and small patella syndrome. (2013)
  • Author(s): Kaneko H, Matsushita M, Kitoh H, Mishima K, Kadono I, Nishida Y, Ishiguro N, Nishimura G.
  • Organizer: ISDS 11th Biennial Meeting
  • Place of Presentation: Bologna, Italy
• [Presentation] Meclozine facilitates chondrocyte proliferation and differentiation by attenuating abnormally activated fibroblast growth factor receptor 3 (FGFR3) signaling in achondroplasia. (2013)
  • Author(s): Matsushita M, Kitoh H, Kaneko H, Mishima K, Ishiguro N, Ohno K.
  • Organizer: ISDS 11th Biennial Meeting
  • Place of Presentation: Bologna, Italy
• [Presentation] Meclozineは軟骨無形成症におけるFGFR3シグナルによる軟骨細胞の増殖・分化抑制をレスキューする (2013)
  • Author(s): 松下雅樹、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、石黒直樹、大野欽司
  • Organizer: 第28回日本整形外科学会基礎学術集会
  • Place of Presentation: 幕張メッセ（千葉市）
• [Presentation] DDH整復後の遺残性臼蓋形成不全に対するソルター骨盤骨切り術の長期成績不良因子 (2013)
  • Author(s): 金子浩史、鬼頭浩史、三島健一、松下雅樹、北村暁子、石黒直樹、服部義
  • Organizer: 第24回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] 骨延長後の骨折に関連する因子 (2013)
  • Author(s): 鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹、門野泉、杉浦洋、長谷川幸、石黒直樹
  • Organizer: 第24回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] 下肢長不等例における脚長差の経時的変化 (2013)
  • Author(s): 三島健一、鬼頭浩史、金子浩史、松下雅樹、杉浦洋、長谷川幸、北村暁子、石黒直樹
  • Organizer: 第24回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] 軟骨無形成症に対する下肢骨延長術に伴う下肢関節可動域制限 (2013)
  • Author(s): 門野泉、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹、長谷川幸、杉浦洋、石黒直樹
  • Organizer: 第24回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] 軟骨無形成症に対する下肢骨延長後の歩行分析 (2013)
  • Author(s): 馬渕晃好、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹
  • Organizer: 第24回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] Potential clinical application of meclozine, an anti-histamine drug, for short stature in FGFR3-related skeletal dysplasias. (2013)
  • Author(s): Matsushita M, Kitoh H, Kaneko H, Mishima K, Ishiguro N, Ohno K.
  • Organizer: 第24回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] 進行性骨化性線維異形成症におけるX線学的診断指針 (2013)
  • Author(s): 三島健一、鬼頭浩史、芳賀信彦、中島康晴、金子浩史、松下雅樹、西田佳弘、石黒直樹
  • Organizer: 第25回日本整形外科学会骨系統疾患研究会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] Proximal focal femoral deficiencyの重症例 (2013)
  • Author(s): 松下雅樹、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、門野泉、西田佳弘、石黒直樹
  • Organizer: 第25回日本整形外科学会骨系統疾患研究会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜（横浜市）
• [Presentation] 右大腿骨遠位BCG骨髄炎の1例 (2013)
  • Author(s): 金子浩史、鬼頭浩史、三島健一、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第28回東海小児整形外科懇話会
  • Place of Presentation: 大正製薬株式会社名古屋支店（名古屋）
• [Presentation] 進行性骨化性線維異形成症における骨格変形 (2013)
  • Author(s): 三島健一、鬼頭浩史、金子浩史、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第28回東海小児整形外科懇話会
  • Place of Presentation: 大正製薬株式会社名古屋支店（名古屋）
• [Presentation] 乳児期に確定診断に至ったMesomelic dysplasia Robinow typeの1例 (2013)
  • Author(s): 松下雅樹、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、石黒直樹
  • Organizer: 第28回東海小児整形外科懇話会
  • Place of Presentation: 大正製薬株式会社名古屋支店（名古屋）
• [Presentation] 先天性股関節脱臼保存治療後の臼蓋発育について (2012)
  • Author(s): 鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第51回小児股関節研究会
  • Place of Presentation: ホテルスプリングス幕張（千葉市美浜区）
• [Presentation] 歩行開始後に診断したDDHに対するoverhead traction法の長期成績 (2012)
  • Author(s): 金子浩史、鬼頭浩史、三島健一、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第23回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部百年講堂（福岡市東区）
• [Presentation] ヒト骨髄由来間葉系細胞の細胞増殖および骨芽細胞分化能 (2012)
  • Author(s): 鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第23回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部百年講堂（福岡市東区）
• [Presentation] 骨形成促進効果を有する既存薬の同定とその臨床応用の可能性 (2012)
  • Author(s): 三島健一、鬼頭浩史、金子浩史、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第23回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部百年講堂（福岡市東区）
• [Presentation] 同側にrudimentary great toeを合併した先天性下腿弯曲症の１例 (2012)
  • Author(s): 萩野精太、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第23回日本小児整形外科学会学術集会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部百年講堂（福岡市東区）
• [Presentation] 進行性骨化性線維異形成症に対するマレイン酸ペルヘキシリンの治療経験 (2012)
  • Author(s): 鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、松下雅樹、石黒直樹
  • Organizer: 第24回日本整形外科学会骨系統疾患研究会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部百年講堂（福岡市東区）
• [Presentation] 軟骨無形成症における低身長に対する治療薬の検討 (2012)
  • Author(s): 松下雅樹、鬼頭浩史、金子浩史、三島健一、石黒直樹、大野欽司
  • Organizer: 第24回日本整形外科学会骨系統疾患研究会
  • Place of Presentation: 九州大学医学部百年講堂（福岡市東区）