膠芽腫・髄芽腫に対するＩＦＮ－β治療効果への関与が示唆されるｍｉＲ－４３１の解析

• Project/Area Number: 24701002
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Tumor diagnosis
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 田中 健史 千葉大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80595976)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2014-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2012)
• Budget Amount: ¥4,420,000 (Direct Cost: ¥3,400,000、Indirect Cost: ¥1,020,000); Fiscal Year 2014: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000); Fiscal Year 2013: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2012: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
• Keywords: マイクロRNA-431 / インターフェロンβ / 細胞増殖 / microRNA

Research Abstract

前年度までの成果を踏まえ、miR-431のターゲット遺伝子としてSOCS6について解析を進めた。培養細胞に至適濃度のIFN-βを添加した培養液で48時間培養した後、SOCS6の発現量をリアルタイムPCR法で確認した結果、有意な発現上昇を認めた。さらに至適濃度のIFN-β添加と同時にmiR-431 moleculeをトランスフェクションした培養液で48時間培養した後に同様な解析をした結果、SOCS6の有意な発現上昇は認められなかった。
次にタンパクレベルの発現解析を行う為に、上記と同条件のサンプルを準備し、ウエスタンブロッティング法を試みた。まずターゲット遺伝子であるSOCS6の発現を確認した結果、IFN-β添加のみで培養した細胞では、SOCS6の発現上昇を認め、IFN-βとmiR-431 moleculeを同時に添加して培養した細胞では、SOCS6の発現上昇は認められなかった。更にSOCS遺伝子群がJAK/STAT シグナル経路の伝達抑制に関与していることに注目し、その中でもSOCS6が膠芽腫、髄芽腫において、同様な役割を果たすかどうかを検討した。その結果、SOCS6はJAK1、STAT2の発現抑制を介し、膠芽腫ではMAPK経路を、髄芽腫ではPI3K/AKT経路を抑制させることが分かった。我々は、IFN-βによる細胞増殖抑制メカニズムについて、miR-431発現の関与を強く疑い検討を進めていたが、本研究より膠芽腫、髄芽腫の培養細胞において、IFN-βはmiR-431の発現を有意に減少させ、それによりSOCS6の発現を上昇させる。更にSOCS6はJAK/STATシグナル経路に関与する遺伝子群にも作用し、JAK1、STAT2の発現を抑制させることで、細胞増殖にも深く関与するMAPK、PI3K/AKT経路を調整することが分かった。

Research Products

• [Journal Article] Lipopolysaccharide blocks induction of unfolded protein response in hum an hepatoma cell lines (2013)
  • Author(s): Jiang X., et al.
  • Journal Title: Immunol Lett. Volume: 152 Issue: 1 Pages: 8-19
  • DOI: 10.1016/j.imlet.2013.03.006
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] A primary arterio enteric fistula with takayasu arteritis. (2013)
  • Author(s): Minemura S, Matsumura T, Arai M, Oyamada A, Saito K, Sazuka S, Tsuboi M, Maruoka D, Tanaka T, Nakagawa T, Katsuno T, Ishida K, Matsumiya G, Yokosuka O.
  • Journal Title: Internal Medicine Volume: 52(3) Pages: 359-362
  • NAID: 130003365871
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Peginterferon Alfa-2a plus ribavirin in Japanese patients infected with hepatitis C virus genotype 2 who failed previous interferon therapy. (2013)
  • Author(s): Kanda T, Nakamoto S, Nishino T, Takada N, Tsubota A, Kato K, Miyamura T, Maruoka D, Wu S, Tanaka T, Arai M, Mikami S, Fujiwara K, Imazeki F, Yokosuka O.
  • Journal Title: Int J Med Sci Volume: 10 Issue: 1 Pages: 43-49
  • DOI: 10.7150/ijms.5358
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Hepatitis B virus e antigen physically associates with receptor-interacting serine/threonine protein kinase 2 and regulates IL-6 gene expression. (2012)
  • Author(s): Wu S, Kanda T, Imazeki F, Nakamoto S, Tanaka T, Arai M, Roger T, Shirasawa H, Nomura F, Yokosuka O.
  • Journal Title: The Journal of Infectious Diseases Volume: 206(3) Issue: 3 Pages: 415-420
  • DOI: 10.1093/infdis/jis363
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Inhibition of cell viability by human IFN-b is mediated by microRNA-431 (2012)
  • Author(s): Tanaka T, Sugaya S, Kita K, Arai M, Kanda T, Fujii K, Imazeki F, Sugita K, Yokosuka O, Suzuki N
  • Journal Title: Int J Oncol Volume: 40 Pages: 1470-6
  • DOI: 10.3892/ijo.2012.1345
  • Peer Reviewed
• [Presentation] The expression levels of sonic hedgehog and IL1β correlate with the speed of gastric mucosa regeneration (2013)
  • Author(s): Tanaka, Takeshi; Arai, Makoto; Maruoka, Daisuke; Matsumura, Tomoaki; Nakagawa, Tomoo; Katsuno, Tatsuro; Sugaya, Shigeru;Kita, Kazuko; Kaneda Atsushi; Yokosuka, Osamu
  • Organizer: 2013年米国消化器病週間（DDW 2013 )
  • Place of Presentation: Orange County Convention Center(オーランド / 米国)
• [Presentation] Human IFN-βによる細胞増殖抑制はmiRNA-431により調節される (2012)
  • Author(s): 田中健史 新井誠人 神田達郎 菅谷茂 喜多和子 杉田克生 今関文夫 横須賀收
  • Organizer: 第77回日本インターフェロン・サイトカイン学会学術集会
  • Place of Presentation: 神戸商工会議所
• [Presentation] Inhibition of cell viability by IFN-beta is mediated by microRNA-431 in glioblastoma and medulloblastoma (2012)
  • Author(s): Takeshi Tanaka, Makoto Arai, Tatsuo Kanda, Fumio Imazeki, Osamu Yokosuka
  • Organizer: 第71回日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: ロイトン札幌