リジン脱メチル化酵素ＫＤＭ７Ａによるｐ５３活性化機構の解明

• Project/Area Number: 24770165
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Molecular biology
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 米沢 理人 東京大学, 先端科学技術研究センター, 助教 (10579155)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2015-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000); Fiscal Year 2013: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000); Fiscal Year 2012: ¥2,340,000 (Direct Cost: ¥1,800,000、Indirect Cost: ¥540,000)
• Keywords: 細胞生物学 / 生化学 / タンパク質間相互作用 / 癌 / 分子生物学 / リジンメチル化修 / アセチル化修飾 / リジン脱メチル化酵素 / アポトーシス / 酵素 / 発現制御 / シグナル伝達

Outline of Annual Research Achievements

平成24年度実績に記述したMCF-7細胞内におけるp53-KDM7Aの相互作用は、GE社製Donkey anti-rabbit IgG-HRP を用いて行なった結果によるものであったが、この抗体は免疫沈降に用いたanti-p53 及び anti-KDM7A (いずれも mouse IgG) にcross-reactしてしまっており、また、丁度その分子量がp53の分子量に近いことから来る解釈の誤りであることが分かった。そこで、慎重にmouse IgGにcross-reactしないことが確認されたCST社製 goat anti-rabbit IgG-HRPで同様の実験を行なったところ、内在性p53-KDM7Aの相互作用は確認できなかった。細胞内においてごくminor fractionのp53がKDM7Aと相互作用する可能性も残されたので、FLAG-KDM7Aを導入したHEK293F細胞を抗FLAG M2ゲルで精製後、FLAGペプチドで溶出し、抗p53抗体でブロットしたところ、FLAG-KDM7Aを導入していない細胞に比べ優位に、また再現性をもってp53が溶出された。以上から、細胞内においてもp53とKDM7Aが直接相互作用することが確認された。

Research Products

• [Journal Article] Identification of a Selective Inhibitor of KDM2/7 Histone Lysine Demethylases and its Antiproliferative Activity. (2013)
  • Author(s): Suzuki T, Ozasa H, Itoh Y, Zhan P, Sawada H, Mino K, Walport L, Ohkubo R, Kawamura A, Yonezawa M, Tsukada Y, Tumber A, Nakagawa H, Hasegawa M, Sasaki R, Mizukami T, Schofield CJ, Miyata N
  • Journal Title: Journal of Medicinal Chemistry Volume: 56 Issue: 18 Pages: 7222-7231
  • DOI: 10.1021/jm400624b
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] Regulation of p53 activity by the Jumonji-C domain-containing enzyme KDM7A (2012)
  • Author(s): 米沢理人
  • Organizer: エピジェネティクス研究会年回
  • Place of Presentation: 東京
• [Presentation] Regulation of p53 activity by the Jumonji-C domain-containing enzyme KDM7A (2012)
  • Author(s): 米沢理人
  • Organizer: 日本癌学会学術総会
  • Place of Presentation: 札幌
• [Presentation] Regulation of p53 activity by the lysine demethylase KDM7A
  • Author(s): Masato Yonezawa
  • Organizer: 日本エピジェネティクス研究会年会
  • Place of Presentation: 奈良
• [Presentation] The role of lysine demethylase KDM7A in DNA damage response
  • Author(s): Masato Yonezawa
  • Organizer: 第36回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 神戸