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Construction of a fluorescent uricase fusion protein for characterization of urate transport

Research Project

Project/Area Number 24790051
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeMulti-year Fund
Research Field Physical pharmacy
Research InstitutionTokyo University of Pharmacy and Life Science

Principal Investigator

NAKAMURA Makiko  東京薬科大学, 薬学部, 助教 (80447557)

Project Period (FY) 2012-04-01 – 2015-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2014)
Budget Amount *help
¥2,990,000 (Direct Cost: ¥2,300,000、Indirect Cost: ¥690,000)
Fiscal Year 2014: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2013: ¥1,040,000 (Direct Cost: ¥800,000、Indirect Cost: ¥240,000)
Fiscal Year 2012: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
Keywords尿酸 / 尿酸トランスポーター / 蛍光タンパク質 / 腎臓 / 高尿酸血症 / トランスポーター / ウリカーゼ / 蛍光 / 蛍光プローブ
Outline of Final Research Achievements

Serum urate level is strictly regulated by renal urate reabsorption and secretion through the urate transporters. In this study, it was aimed to develop a high-throughput biosensing method for analysis of urate transporter. A fusion protein consisted of uricase and hydrogen peroxide-dependent fluorescent protein (HyPer) was constructed. Since uricase produces hydrogen peroxide when oxidizes urate, the fusion protein could detect real-time urate uptake with fluorescence.
Monkey renal epithelial-like Cos7 cells were co-transfected with fusion protein and urate transporter 1 (URAT1), and incubated 48 hours. The fusion protein/URAT1 co-transfected cells showed the significant increase of fluorescence when 15-200 micro M of urate was applied. The fluorescence was suppressed with 25 micro M of benzbromarone, that was a URAT1 inhibitor.
In conclusion, the constructed uricase-HyPer fusion protein could detect urate uptake specifically.

Report

(4 results)
  • 2014 Annual Research Report   Final Research Report ( PDF )
  • 2013 Research-status Report
  • 2012 Research-status Report
  • Research Products

    (49 results)

All 2015 2014 2013 2012 2011 Other

All Journal Article (9 results) (of which Peer Reviewed: 9 results,  Open Access: 1 results) Presentation (40 results)

  • [Journal Article] Effects of irbesartan on serum uric acid levels in patients with hypertension and diabetes.2014

    • Author(s)
      Makiko Nakamura, Nobuo Sasai, Ichiro Hisatome, Kimiyoshi Ichida
    • Journal Title

      Clinical Pharmacology: Advances and Applications

      Volume: 6 Pages: 79-86

    • DOI

      10.2147/cpaa.s61462

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    • Author(s)
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    • Journal Title

      Journal of chromatography. B, Analytical technologies in the biomedical and life sciences

      Volume: 976-977 Pages: 55-60

    • DOI

      10.1016/j.jchromb.2014.11.010

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    • Journal Title

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      Volume: 10 Issue: 1 Pages: 31-31

    • DOI

      10.1186/2045-8118-10-31

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    • Journal Title

      Eur J Hum Genet

      Volume: 21 Issue: 10 Pages: 1067-1073

    • DOI

      10.1038/ejhg.2013.3

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      Volume: 3 Issue: 1 Pages: 1-7

    • DOI

      10.1038/ncomms1756

    • URL

      https://localhost/en/publications/719645f5-4ec4-4f6b-a2a8-f58d7f666857

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    • NAID

      130003378906

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      福岡
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    • Author(s)
      山根 千佳、細野 彩奈、中村 真希子、市田 公美
    • Organizer
      第35回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      福岡
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  • [Presentation] ABCG2機能低下による「腎外排泄低下型」高尿酸血症

    • Author(s)
      中山 昌喜、松尾 洋孝、高田 龍平、清水 徹、春日 裕志、中島 宏、中村 好宏、高田 雄三、河村 優輔、内海 由貴、中村 真希子、櫻井 裕、細谷 龍男、四ノ宮 成祥、鈴木 洋史、市田 公美
    • Organizer
      第127回日本薬理学会関東部会
    • Place of Presentation
      東京
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Published: 2013-05-31   Modified: 2019-07-29  

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