Ｐ２Ｘ７受容体を介したシグナル伝達よるシェーグレン症候群発症機序の解明

• Project/Area Number: 24791993
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Pathobiological dentistry/Dental radiology
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 伊藤 あゆみ 東北大学, 大学病院, 医員 (50622990)
• Project Period (FY): 2012-04-01 – 2016-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2014: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2013: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2012: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
• Keywords: シェーグレン症候群

Outline of Annual Research Achievements

本研究ではシェーグレン症候群におけるP2X7受容体の関与についての検討を行うため、実際のシェーグレン症候群患者および健常者より下唇小唾液腺のサンプル収集を行った。シェーグレン症候群患者の小唾液腺については、摘出後病理切片を作成、染色を行い、炎症の程度に応じて４段階のステージに分類した。また、小唾液腺の採取と併せて、炎症による耳下腺組織の損傷の状態を確認するための耳下腺造影検査と、自己抗原である抗Ro/SS-A抗体・抗La/SS-B抗体の発現の状況をみるための血液検査のデータを収集した。
また、採取した下唇小唾液腺から凍結切片を作成し、P2X7受容体およびIL-18、IFN-γ等の炎症性サイトカインの発現を免疫染色にて検討するため、条件検討を行った。
先行研究により、ヒト唾液腺上皮細胞株においてP2X7受容体が存在し、高濃度の細胞外ATPで刺激することによって、細胞膜表面にMHC classIIが発現し、さらに培養液中にMHC classIIを内包したexosomeが放出されることが明らかになっており、ヒト初代培養系においても同様の免疫反応が認められるかを検証するため、P2X7受容体発現、高濃度ATP刺激によるMHC classII発現の解析を試みた。健常者より下唇小唾液線を採取し、培養を行ったが、解析に必要となる十分な量の細胞を確保することが難しく、解析を行うには至らなかった。そのため、細断した細胞片から細胞培養を進める方法から、酵素により細胞間の結合を分離し、培養を進める方法へ改良を行うことで、細胞の回収量を増やすことが可能となったが、十分量を安定して確保することは困難であった。