樹状細胞における人工がん抗原WT1ペプチドと樹状細胞の効率的な反応条件の確立

• Project/Area Number: 24931031
• Research Category: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 臨床医学
• Research Institution: Shinshu University
• Principal Investigator: 樋口 由美子 信州大学, 医学部附属病院, 臨床検査技師
• Project Period (FY): 2012
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2012)
• Budget Amount: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000); Fiscal Year 2012: ¥600,000 (Direct Cost: ¥600,000)
• Keywords: 樹状細胞 / WT1ペプチド / WT1特異的リンパ球

Research Abstract

実験内容と結果
1)WT1ペプチドと樹状細胞(DC)の効率的な反応条件の検討
FITCで蛍光標識したWT1ペプチドをDCに4℃、室温、37℃の温度条件下で、5分、10分、15分、30分、1時間パルスし、WT1結合DCをフローサイトメーターにより測定した。その結果、4℃では30分(30.0%)1時間(34.6%)。室温では30分(83.2%)1時間(97.2%)。37℃では5分(54.9%)10分(89.3%)、15分(98.2%)であった。以上より、37℃10分で最も短時間で高率にWT1結合DCを作製できた。
反応温度、反応時間による生細胞率の低下も認められなかった。
2)WT1特異的リンパ球の誘導
次に37℃10分でWT1ペプチドをパルスしたDCとリンパ球を共培養し、2週間後にフローサイトメーターを用いてテトラマー解析を行い、WT1特異的リンパ球を検出した。同様に(4℃30分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)及び(WT1ペプチド10μM+DC+リンパ球)もそれぞれ共培養し、37℃10分パルスDCにおけるWT1特異的リンパ球の誘導率と比較した。
その結果、(WT1ペプチド10μM+DC+リンパ球)>(37℃10分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)>(4℃30分WT1ペプチドパルスDC+リンパ球)の順に高頻度にWT1特異的リンパ球が誘導された(6:4:1)。
3)細胞障害活性の測定
誘導できたWT1特異的リンパ球の絶対数が少なかっため、細胞障害活性を測定することはできなかった。
今後、より多くのWT1特異的リンパ球を誘導できる条件の検討が必要である。
結論
DCとWT1ペプチドの効率的な反応条件は37℃10分であった。
WT1ペプチドパルスDCが、WT1特異的リンパ球を誘導することが確認でき、しかもWT1ペプチド結合DCが多いほど誘導率は高かった。