| Project/Area Number |
24K11857
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 55020:Digestive surgery-related
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| Research Institution | Jikei University School of Medicine |
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Principal Investigator |
恩田 真二 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (10459620)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
白井 祥睦 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (10785364)
春木 孝一郎 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (60720894)
谷合 智彦 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (60961860)
池上 徹 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (80432938)
古川 賢英 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (80624973)
柳垣 充 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (80979435)
安田 淳吾 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (90896870)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2027-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2026: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | レンバチニブ耐性 / マイトファジー / オートファジー / 肝細胞癌 / 癌微小環境 / 分子標的薬 / 薬剤耐性 / レンバチニブ |
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| Outline of Research at the Start |
肝細胞癌に対する治療成績は、レンバチニブに代表される分子標的薬や免疫チェックポイント阻害薬などの新規薬物療法の導入により向上し、著明な腫瘍縮小効果により切除不能症例から根治切除への移行が可能となった。しかし、レンバチニブの治療抵抗性や治療薬の耐性獲得が問題となっている。肝細胞癌を含む多くの癌では、腫瘍細胞を取り巻く免疫細胞・線維が細胞・血管内皮細胞などの間質の細胞と癌細胞そのものが相互作用を介して発育・進展に関与していると考えれている。本研究では、癌微小環境に着目し、レンバチニブ耐性獲得機序を明らかにするとともに、肝細胞癌に対する癌微小環境に着目した新たな治療戦略を確立することを目指す。
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| Outline of Annual Research Achievements |
肝細胞癌に対するレンバチニブの治療抵抗性や治療中のレンバチニブ耐性獲得のメカニズム解明について研究を進めた。
レンバチニブ耐性株（HuH7、Hep3B）において、電子顕微鏡による細胞内オルガネラの観察実験で、レンバチニブ耐性獲得後に細胞内に小さく不整なミトコンドリアが蓄積していることを確認した。さらに、免疫蛍光染色を用いたミトコンドリア染色で、レンバチニブ耐性株におけるミトコンドリアの蓄積を確認した。また、ミトコンドリア機能の評価として、蛍光顕微鏡とフォローサイトメトリーを用いてミトコンドリア膜電位を間接的に測定したところ、レンバチニブ耐性株におけるミトコンドリア膜電位の低下を確認した。
レンバチニブ耐性株の細胞内へのミトコンドリア蓄積の原因究明のため、ミトコンドリアの選択的オートファジーであるマイトファジーを定性・定量する実験を行い、マイトファジーの亢進を確認した。またウエスタンブロッティングでオートファジー関連タンパク質であるLC3、p62/SQSTM1、mTOR、マイトファジーに重要な役割を果たすユビキチンリガーゼであるPINK1/Parkinの発現量がレンバチニブ耐性株で亢進していることを確認した。
また、レンバチニブ耐性株においてオートファジー・マイトファジーシグナル上流にあるPI3K阻害薬であるwortmannin30µM、ideralisib、buparlisibにより、レンバチニブ感受性が改善することを確認した。mdivi-1やオートファジー阻害作用を持つ抗菌薬バフィロマイシンA1では、レンバチニブ感受性の改善は認めなかった。
レンバチニブ耐性皮下腫瘍モデルを用いたマイトファジー阻害薬併用によるレンバチニブ耐性克服効果を評価する実験では、マイトファジー阻害薬併用により、有意に皮下腫瘍の増殖が抑制された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
予定した実験を順調に行っており、予測した結果が得られている。
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| Strategy for Future Research Activity |
PI3K阻害薬投与下でのオートファジー・マイトファジータンパク質の発現量の変化を確認するとともに、mTORを阻害する薬剤でレンバチニブ耐性を獲得するか確認する。
皮下腫瘍モデルへのマイトファジー阻害薬やオートファジー阻害薬投与後の腫瘍増殖能を評価する。
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