| Project/Area Number |
24K12509
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 56030:Urology-related
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
小畠 浩平 広島大学, 病院(医), 助教 (10749998)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
武本 健士郎 広島大学, 医系科学研究科(医), 助教 (70887124)
神沼 修 広島大学, 原爆放射線医科学研究所, 教授 (80342921)
日向 信之 広島大学, 医系科学研究科(医), 教授 (10598816)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2027-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000)
Fiscal Year 2026: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
Fiscal Year 2024: ¥2,210,000 (Direct Cost: ¥1,700,000、Indirect Cost: ¥510,000)
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| Keywords | 膀胱癌 / ウイルス療法 |
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| Outline of Research at the Start |
BCG不応性膀胱癌に対する、膀胱温存を前提とした新規治療の確立は喫緊の課題である。申請者らはこの課題解決のため、腫瘍の直接的な障害効果と持続的な抗腫瘍免疫の賦活化効果を示す新たな治療モダリティを考案した。本研究は、3種のサイトカイン (IL-15, GM-CSF, Flt3L) を同時に産生可能な、全く新たなワクシニアウイルス製剤 (VVM)を用い、VVMの単独使用またはBCG治療後の使用における治療効果と奏功機構を、マウス同種同所移植モデルを用いて明らかにする事を目的として実施する。本製剤は、癌細胞特異的に増殖して腫瘍障害活性を示し、持続的かつ強力な抗腫瘍免疫の賦活化も期待される。
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| Outline of Annual Research Achievements |
1年目の研究では、対照群と比較してVVM（サイトカイン3種混合産生ウイルスワクチン）の腫瘍抑制効果を検証する事を目的として研究を行った。VVMの容量依存性を10^5～10^7PFU / 50マイクロリットルの間で検討する。移植後6, 9日目に各薬剤の膀注を行った。
VVM群、VWT群（各n = 5)の2群に対して、膀胱内同種同所移植を施行した。
野生型B6マウスを用いて、腹腔内麻酔（3種混合）下に、経尿道的にガイドワイヤー（０．０１６in.0.41mm）を挿入し、Over the guideでサーフロー２４G外筒を膀胱まで挿入した。その状態で、硫酸プロタミンを膀胱内注入して留置。排液後に、移植用細胞（MB49-GFP 4000細胞/mlを50マイクロリットル;l膀胱内注入して30分留置する事で膀胱癌同種同所移植手技を終えた。移植後5日目でIVISにより移植細胞が生着している事を確認した。
移植後6日目、9日目にVVMまたはVWT（コントロール）を1匹あたり6.0*10^7/300マイクロリットル膀胱内注入した。移植後12日目に採材し、採材直後の膀胱を用いてIVISでGFP蛍光強度を測定した。更に膀胱重量を測定したのち、ホルマリン固定後に病理組織学的診断を行った。
膀胱重量、病理組織結果共に、個体間の差が非常に大きく統計学的な有意差には至らなかった。同様の実験系を複数回行う事で、手技の安定化を図り有意差を再度検定する予定とした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の予定通り野生型マウスを用いた同種同所移植自体は成功しており、またIVISでも蛍光強度の測定自体は可能な事からGFP発現株の作製にも成功している。
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| Strategy for Future Research Activity |
手技の安定化を図り、均一なデータを基に統計学的な有意差検定を行う。その上で、1－2年目に施行予定であった実験内容に進む。実験内容としては、BCGからVVMに切り替えた場合の治療効果を、BCG単独投与群と比較検証する。BCGは既報に準じて4×10^6 PFU / 50マイクロリットルとする。VVMは薬剤切り替え後、計3回投与する。移植後15, 18, 21, および30, 90日目に各群の採材を行い、A)と同様の解析を行う。
本行程により、BCG治療歴のある症例に対するVVM傍注療法の短期的効果および、抗腫瘍免疫の賦活化による長期的な抗腫瘍効果を明らかにする。
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