| Project/Area Number |
24K12528
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 56040:Obstetrics and gynecology-related
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| Research Institution | Nagoya University |
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Principal Investigator |
稲見 恵理 名古屋大学, 医学系研究科, 研究員(学振RPD) (80710615)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
梶山 広明 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (00345886)
横井 暁 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (30737135)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2027-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2026: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
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| Keywords | 細胞外小胞 / 乳酸菌 / 卵巣がん / 腟内細菌 |
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| Outline of Research at the Start |
卵巣がんは予後の悪い悪性腫瘍で、主要サブタイプである高異型度漿液性がんは特に早期発見が困難かつ発見時多くの症例で腹膜播種性転移を既に生じておりそのメカニズム解明と新たな治療法の開発が望まれている。
近年、乳癌や肺癌などのヒト固形腫瘍がん細胞中に細菌由来DNAが検出され、細菌が腫瘍悪性化やその多様性に寄与する可能性が示されている。
我々は過去の研究から腟細菌叢の腫瘍への影響について確信し、菌体が直接卵管上皮細胞に影響するわけではなく、腟細菌叢が放出する細胞外小胞（bacterial EV: bEV）が影響していると仮説を立てた。bEVがどのように卵巣がん初期発生機構に関与するかを詳細に解析する。
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は腟内細菌が放出する細胞外小胞(Bacterial Extracellular vesicles: BEV)がどのように高異型度漿液生卵巣がん(HGSC)発生の悪性化に関与するのかを解明することを目的としている。ヒト細胞由来EVに関する研究は過去10数年程で世界的に劇的に進んでいる。しかし、細菌が放出するEVは近年注目されはじめたばかりであり、まだその機能は未知である。数年前までは腫瘍多様性の原因として細菌の関与は上げられていないが、近年関連が示唆されはじめ、その役割の理解が求められている(Hanahan D. Cancer Discov 2022)。本研究はBEVという観点から卵巣がんの発生初期悪性化に関する研究を行うという点で、過去に報告のない新しい疾患メカニズムに言及でき、新しい知見を創出する。当該年度に予定していた①腟内BEVの分子プロファイリング②BEVを介する卵管上皮細胞(Fallopian tube cell:FT細胞)悪性化制御分子の探索と検証について計画をしていた。①では(a)7菌種から回収したBEV搭載RNAプロファイリング (b)卵巣がん患者卵管由来BEVの回収とRNAプロファイリング (c)卵巣がん患者組織を用いたBEV由来核酸の検証を行う。
(a)(b)の結果より卵巣がん患者で発現の高い卵巣がん患者卵管由来BEV中のRNAの同定に成功した。(C)の卵巣がん患者組織を用いたBEV由来核酸の検証もサンプリングを行いRNA-seqを行いプロファイルを作成した。
②ではFT細胞遊走能を7種の菌体由来BEVで検証した結果、2種の菌体由来BEVに顕著な変化がみられたので、FTE細胞における非足場依存的増殖について検討した結果、BEVは非足場的依存増殖を亢進させる結果が見られた。またそれらのBEVを卵管細胞へ投与し、RNAを回収しRNA-seqでそのシグナル変化を観察した。現在同定した卵巣がん患者卵管采のBEV中で発現の高い核酸を合成、導入をして、BEV投与時と同様なシグナルが観察できるかについて検討中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
我々は既にBEVを回収し、そのsmall RNA-seqのプロファイリング解析とEVシートを用いて患者FTより採取したEV中バクテリアRNAを同定した。さらに卵巣がんで特異的に発現が上昇している核酸配列を同定している。そしてその配列を特許として申請中である。その特定した核酸配列が卵巣がんの初期悪性化に関わるかを検証するための実験系を既に立ち上げ核酸配列の合成にもとりかかっている。投与方法については今後検討が必要である。また卵巣がんはTP53の変異は共通しており、TP53が卵巣がん悪性化に関与する、そのためTP53をKOをしたりして、機能解析を予定しているが、CRISPAR-Cas9によるTP53KO FT細胞を作成中である。以上から概ね本研究は順調に進んでいると言える。
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| Strategy for Future Research Activity |
我々は卵巣がん患者で発現が高いBEV由来核酸配列を同定している。今後はその機能解析を行なっていく予定である。必要な細胞等も現在準備中であり、本研究の推進が期待できる。
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