| Project/Area Number |
24K13067
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Multi-year Fund |
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| Section | 一般 |
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| Review Section |
Basic Section 57060:Surgical dentistry-related
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
清水 香澄 三重大学, 医学部附属病院, 講師 (20378368)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
村田 琢 三重大学, 医学部附属病院, 講師 (80242965)
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| Project Period (FY) |
2024-04-01 – 2027-03-31
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| Project Status |
Granted (Fiscal Year 2024)
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| Budget Amount *help |
¥4,680,000 (Direct Cost: ¥3,600,000、Indirect Cost: ¥1,080,000)
Fiscal Year 2026: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2024: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
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| Keywords | Phosphodiesterase / 悪性腫瘍 / phosphodiesterase |
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| Outline of Research at the Start |
Phosphodiesterase (PDE)はPDE1からPDE11までの11種類が報告されている。われわれはPDE1が口腔悪性黒色腫細胞で発現し、PDE1、PDE5両方の阻害効果をもつsildenafilが、PDE1阻害によってその運動能を抑制することを発見した。本研究ではPDE1Cの細胞内局在や、PDE1Cと複合体を形成すると考えられるA-kinase-anchoring protein(AKAP)等の足場タンパク質および運動能に関与する下流シグナルを明らかにする。
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| Outline of Annual Research Achievements |
Phosphodiesterase(PDE)は、細胞内シグナル伝達物質であるcAMPやcGMPの分解酵素であり、PDE1から11まで11種類あることが知られている。PDE1にはPDE1A、PDE1B、PDE1Cのサブタイプがあり、それぞれにさらにバリアントが存在する。今回、 PDE1C1をほとんど発現していない口腔悪性黒色腫細胞に PDE1C1発現プラスミドを導入し強制発現させ、免疫染色にてその細胞内局在について検討した。
細胞は、当教室で樹立したヒト口蓋由来悪性黒色腫 PMP細胞を使用した。プラスミドに PDE1C1発現遺伝子を組み込み、 Lipofectamine2000にて PMP細胞に導入した。 8well culture slideにPDE1C1を強制発現させたPMP細胞を播種し、一次抗体は抗PDE1C抗体(abcam)と抗ディスルフィドイソメラーゼ抗体(小胞体マーカー)を混合して一晩作用させた。二次抗体は、Goat Anti-Rabbit IgG H&L (Alexa Fluor 488) preadsorbed (abcam)、Goat anti-Mouse IgG (H+L) highly cross-adsorbed secondary antibody(Alexa Fluor 594) (Thermo Fisher scientific)を混合し作用させた。核は4',6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI)で染色し、キーエンス蛍光顕微鏡BZ-X700で観察した。
免疫細胞化学染色の結果、 PDE1C1は小胞体マーカーである Protein Disulfide Isomeraseの発現と一致しており、PDE1C1は小胞体に発現していることが示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
免疫細胞染色で、PDE1C1が小胞体に発現していることが確認できた。
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| Strategy for Future Research Activity |
細胞内で、PDE1C1と複合体を形成している分子の探索(AKAP等)や運動時にleading edgeにPDE1C1が存在するかどうかの確認等を行う予定としている。
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