レンバチニブ耐性肝細胞癌に対する革新的治療戦略の開発

• Project/Area Number: 24K19326
• Research Category: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: Basic Section 55010:General surgery and pediatric surgery-related
• Research Institution: Jikei University School of Medicine
• Principal Investigator: 安田 淳吾 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教 (90896870)
• Project Period (FY): 2024-04-01 – 2027-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2024)
• Budget Amount: ¥4,550,000 (Direct Cost: ¥3,500,000、Indirect Cost: ¥1,050,000); Fiscal Year 2026: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2025: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000); Fiscal Year 2024: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000)
• Keywords: レンバチニブ / 肝細胞癌 / チロシンキナーゼ阻害薬 / マイトファジー / レンバチニブ耐性

Outline of Research at the Start

肝細胞癌では、チロシンキナーゼ阻害剤であるレンバチニブが奏効するが、治療当初からの治療抵抗性や治療中の耐性獲得が問題になる。レンバチニブの耐性機序において、ミトコンドリアの選択的オートファジーであるマイトファジーに注目し、本研究は、肝細胞癌において新しい視点であるミトコンドリア代謝に注目し、レンバチニブ耐性肝細胞癌株を作成し、耐性獲得前後で発現量が変動する遺伝子群に着目し、レンバチニブ耐性獲得機序を明らかにし、肝細胞癌に対する新たな治療戦略を確立することを目的とする。

Outline of Annual Research Achievements

各種ヒト肝細胞癌由来細胞株のレンバチニブのIC50を測定した。IC50の低い2細胞株（HuH7, Hep3B）を、レンバチニブ感受性ヒト肝細胞癌細胞株と考え、レンバチニブをIC50程度の濃度から投与を開始し、徐々にレンバチニブの濃度を上昇させて培養した。IC50の10倍以上のレンバチニブ濃度で培養を完了し、生き残った細胞をレンバチニブ耐性獲得細胞株としてIC50を測定した。レンバチニブ耐性獲得前後のHuH7とHep3BのRNAシークエンスを行い、遺伝子発現量の変化）から、レンバチニブ耐性のHuH7とHep3Bに共通して、マイトファジーとオートファジーの経路が亢進していることを確認した。電子顕微鏡による細胞内オルガネラの観察で、レンバチニブ耐性獲得後では、細胞内に小さく不整なミトコンドリアが蓄積していることを確認した）。さらに、免疫蛍光染色(Mittotracker®)を用いてミトコンドリアを染色し、レンバチニブ耐性株におけるミトコンドリアの蓄積を確認した。ミトコンドリア機能の評価として、蛍光顕微鏡とフローサイトメトリーを用いてミトコンドリア膜電位を間接的に測定したところ、レンバチニブ耐性株におけるミトコンドリア膜電位の低下を確認した.

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

着実に結果はでてきている

Strategy for Future Research Activity

レンバチニブ耐性肝細胞癌におけるマイトファジーとオートファジーの評価を行い、マイトファジー阻害薬やオートファジー阻害薬によるレンバチニブ耐性克服効果を評価する。
またレンバチニブ耐性獲得前後のRNAシークエンスから同定された遺伝子のノックダウンによるレンバチニブ耐性克服効果の評価を行う