Development of adenovirus vectors enabling selection of multiple gene knockout cells by self-gene editing.

Research Project

Project/Area Number	24K21938
Research Category	Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
Allocation Type	Multi-year Fund
Review Section	Medium-sized Section 43:Biology at molecular to cellular levels, and related fields
Research Institution	Juntendo University
Principal Investigator	中西友子順天堂大学, 医学部, 准教授 (10344863)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	清野透国立研究開発法人国立がん研究センター, 先端医療開発センター, プロジェクトリーダー (10186356)
Project Period (FY)	2024-06-28 – 2026-03-31
Project Status	Granted (Fiscal Year 2024)
Budget Amount *help	¥6,500,000 (Direct Cost: ¥5,000,000、Indirect Cost: ¥1,500,000) Fiscal Year 2025: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000) Fiscal Year 2024: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Keywords	アデノウイルスベクター / 遺伝子ノックアウト / CRISPR-Cas9 / 多重ノックアウト / GFP
Outline of Research at the Start	本研究では、ガイドRNAを複数同時に発現できる独自の超多重ガイドアデノウイルスベクターがゲノムに組込まれないことを応用して、ゲノムに傷をつけることなくCRISPR-Cas9により一挙に複数遺伝子をノックアウトし、その細胞を非侵襲的かつ容易に選択できる革新的システムを開発する。そのために、多重ガイドRNA発現ユニットに加えて遺伝子編集が起こると緑色蛍光タンパク質が光るようになる仕組みを搭載した新しいアデノウイルスベクターを構築する。本システムは、初代培養細胞を始めとする様々な培養細胞で簡便に同時多重ノックアウトが可能な新技術となる。