Establishment of freezing method of rabbit embryos for cryopreservation of laboratory rabbits as human disease models

• Project/Area Number: 25430091
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Section: 一般
• Research Field: Laboratory animal science
• Research Institution: Saga University
• Principal Investigator: KITAJIMA Shuji 佐賀大学, 総合分析実験センター, 准教授 (70284643)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): NISHIJIMA Kazutoshi 秋田大学, バイオサイエンス教育研究センター, 准教授 (70435874) ; MATSUHISA Fumikazu 佐賀大学, 総合分析実験センター, 助教 (20754253)
• Co-Investigator(Renkei-kenkyūsha): FAN Jianglin 山梨大学, 医学工学総合研究部, 教授 (60272192) ; MATSUDA Yukihisa 秋田大学, バイオサイエンス教育研究センター, 准教授 (50157327)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2016-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥5,200,000 (Direct Cost: ¥4,000,000、Indirect Cost: ¥1,200,000); Fiscal Year 2015: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2014: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2013: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000)
• Keywords: 凍結保存 / バイオリソース / ウサギ / 疾患モデル

Outline of Final Research Achievements

In recent years, cryopreservation by spermatozoa and embryos become an important technique to preserve strains of the laboratory animals as human disease models. In this study, we found that rabbit morula stage embryos vitrified by combination of FES (Ficoll and ethylene glycol in sucrose buffer) and special device (Cryotop) shown good in vitro development rate equally to that of non-freezing embryos. In addition to establishment of cryopreservation method in rabbit embryos, we could do endoscopic embryo transfer technique which is also necessary to preserve useful laboratory rabbit strains as human disease models.

Research Products

• [Journal Article] Motility and fertility of rabbit sperm cryopreserved using soybean lecithin as an alternative to egg yolk (2015)
  • Author(s): Nishijima, K., Kitajima, S., Koshimoto, C., Morimoto, M., Watanabe, T., Fan, J., Matsuda, Y.
  • Journal Title: Theriogenology Volume: 84 Issue: 7 Pages: 1172-1175
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2015.06.018
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Rabbit models for the study of human atherosclerosis: from pathophysiological mechanisms to translational medicine (2015)
  • Author(s): Fan, J., Kitajima, S., Watanabe, T., Xuc, J., Zhang, J., Enqi Liu, E., Chen, Y.E.
  • Journal Title: Pharmacology & Therapeutics Volume: 146 Pages: 104-119
  • DOI: 10.1016/j.pharmthera.2014.09.009
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Effects of Cholesterol-Loaded Cyclodextrins on the Rate and the Quality of Motility in Frozen and Thawed Rabbit Sperm (2014)
  • Author(s): Kazutoshi Nishijima, Shinji Yamaguchi, Mai Tanaka, Yusuke Sakai, Chihiro Koshimoto, Masatoshi Morimoto, TeruoWatanabe, Jianglin Fan, Shuji Kitajima
  • Journal Title: Experimental Animals Volume: 63 Issue: 2 Pages: 149-154
  • DOI: 10.1538/expanim.63.149
  • NAID: 130003391615
  • ISSN: 0007-5124, 1341-1357, 1881-7122
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Effects of type III antifreeze protein on sperm and embryo cryopreservation in rabbit (2014)
  • Author(s): Kazutoshi Nishijima, Mai Tanaka, Yusuke Sakai, Chihiro Koshimoto, Masatoshi Morimoto, TeruoWatanabe, Jianglin Fan, Shuji Kitajima
  • Journal Title: Cryobiology Volume: (in press) Issue: 1 Pages: 22-25
  • DOI: 10.1016/j.cryobiol.2014.04.014
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Human apolipoprotein AII protects against diet-induced atherosclerosis in transgenic rabbits. (2013)
  • Author(s): Wang, Y.
  • Journal Title: Arterioscler Thromb Vas Biol. Volume: 33 Issue: 2 Pages: 224-231
  • DOI: 10.1161/atvbaha.112.300445
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Delaying embryo development by storing at 4°C for synchronization to recipients in microinjection technique in rabbits (2013)
  • Author(s): Nishijima, K., Liu, E., Yamaguchi, S., Tanaka, M., Morimoto, M., Watanabe, T., Fan, J. and Kitajima, S.
  • Journal Title: Lab. Anim Volume: 47 Issue: 1 Pages: 53-57
  • DOI: 10.1258/la.2012.012097
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] 脂質代謝・動脈硬化研究におけるウサギの有用性－ヒトapoAIIトランスジェニックウサギの開発と応用－ (2013)
  • Author(s): 小池智也，北嶋修司，西島和俊，渡辺照男，塩見雅志，範 江林
  • Journal Title: 関西実験動物研究会会報 Volume: 35 Pages: 67-73
• [Presentation] ウサギ胚凍結におけるデバイスおよび凍結液の比較検討 (2016)
  • Author(s): 松久葉一、秋吉俊明、新見 学、森本正敏、範 江林、北嶋修司
  • Organizer: 第63回日本実験動物学会
  • Place of Presentation: ミューザ川崎（神奈川）
  • Year and Date: 2016-05-18
• [Presentation] クライオトップを用いたウサギ桑実胚の凍結における凍結保存液の検討 (2015)
  • Author(s): 秋吉俊明、松久葉一、江里口理嘉、森本正敏、北嶋修司
  • Organizer: 第33回九州実験動物研究会総会
  • Place of Presentation: 九州大学（福岡）
  • Year and Date: 2015-11-07
• [Presentation] Metabolomic profiling reveals muscle metabolites that are associated with favorable glucose, lipid and energy metabolism in lipoprotein lipase transgenic rabbits (2015)
  • Author(s): Nishida, Y, Nishijima, K., Mi-ichi, F., Yamada, Y., Tanaka, H., Fan, J., Kitajima, S., Tanaka, K.
  • Organizer: 5th ICCR Congress on Chronic Societal Cardiometabolic Diseases
  • Place of Presentation: Quebec (Canada)
  • Year and Date: 2015-07-08
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 大豆レシチンを用いたウサギ精子の凍結法検討 (2014)
  • Author(s): 西島和俊、秋吉俊明、森本正敏、渡辺照男、範江林、北嶋修司
  • Organizer: 第3回ウサギバイオサイエンス研究会
  • Place of Presentation: 山梨大学
  • Year and Date: 2014-08-02
• [Presentation] 佐賀大学における遺伝子改変ウサギの開発と凍結精子による保存状況 (2014)
  • Author(s): 北嶋修司、西島和俊、森本正敏、渡辺照男、範 江林
  • Organizer: 第3回ウサギバイオサイエンス研究会
  • Place of Presentation: 山梨大学
  • Year and Date: 2014-08-02
• [Presentation] Metabolic features of skeletal muscle in lipoprotein lipase transgenic rabbits exhibiting anti-obesity/diabetes (2014)
  • Author(s): Nishida, Y., Nishijima, K., Mi-ichi, F., Fan, J., Kitajima, S. and Tanaka, S.
  • Organizer: 10th international conference of the metaboromics society
  • Place of Presentation: Tsuroka, Japan
  • Year and Date: 2014-06-23 – 2014-06-26
• [Presentation] 遺伝子改変ウサギの開発と維持－医学研究への利用 (2013)
  • Author(s): 北嶋修司、西島和俊
  • Organizer: 実験動物医学会シンポジウム
  • Place of Presentation: つくば国際会議場（茨城県つくば市）
  • Invited
• [Presentation] ヒトアポリポ蛋白A-IIは動脈硬化を抑制する：新しいトランスジェニックウサギモデルの開発及び応用 (2013)
  • Author(s): 王 瑶、新見 学、西島和俊、Ahmed Bilal Waqar、于 瑩、小池智也、北嶋修司、範 江林
  • Organizer: 第60回日本実験動物学会総会
  • Place of Presentation: つくば国際会議場（茨城県つくば市）
• [Presentation] ウサギの精子および胚凍結における不凍タンパク質の効果 (2013)
  • Author(s): 西島和俊、田中麻衣、酒井悠輔、越本知大、森本正敏、渡辺照男、範 江林、北嶋修司
  • Organizer: 第60回日本実験動物学会総会
  • Place of Presentation: つくば国際会議場（茨城県つくば市）
• [Presentation] ヒトアポリポ蛋白AII遺伝子導入ウサギの骨代謝 (2013)
  • Author(s): 西島和俊、増山律子、小池智也、森本正敏、渡辺照男、範 江林、北嶋修司
  • Organizer: 第2回ウサギバイオサイエンス研究会
  • Place of Presentation: 山形テルサ（山形県山形市）
• [Presentation] ヒトアポリポ蛋白AII遺伝子導入ウサギの脂質代謝および骨形成能の評価 (2013)
  • Author(s): 西島和俊、増山律子、小池智也、山中仁木、範 江林、北嶋修司
  • Organizer: 第156回日本獣医学会学術集会
  • Place of Presentation: 岐阜大学（岐阜県岐阜市）
• [Presentation] ウサギの麻酔下採血における血清動態に関する知見・第２報 (2013)
  • Author(s): 河村祥介、西島和俊、川辺敏晃、福田孝規、清永智昭、井上聖也、北嶋修司
  • Organizer: 第31回九州実験動物研究会総会
  • Place of Presentation: 八千代座（熊本県山鹿市）
• [Remarks] 研究活動の紹介 （佐賀大学総合分析実験センター生物資源開発部門）
  • URL: http://www.animal.med.saga-u.ac.jp/index.php?id=2
• [Remarks] 当センターで維持している遺伝子改変ウサギ
  • URL: http://www.animal.med.saga-u.ac.jp/index.php?id=13
• [Remarks] 研究活動の紹介（佐賀大学総合分析実験センター生物資源開発部門）
  • URL: http://www.animal.med.saga-u.ac.jp/index.php?id=2
• [Remarks] 研究活動の紹介（佐賀大学総合分析実験センター生物資源開発部門ホームページ）
  • URL: http://www.animal.med.saga-u.ac.jp/index.php?id=2
• [Remarks] 施設で維持している遺伝子改変ウサギ
  • URL: http://www.animal.med.saga-u.ac.jp/index.php?id=13