In-cell NMR study on regulatory mechanism of calcium release by ryanodine receptor

• Project/Area Number: 25650024
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Structural biochemistry
• Research Institution: The University of Tokushima
• Principal Investigator: MAITA Ayako 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学系), 特別研究員(RPD) (60415106)
• Research Collaborator: TSUGITA Saki 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2017-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2016)
• Budget Amount: ¥4,030,000 (Direct Cost: ¥3,100,000、Indirect Cost: ¥930,000); Fiscal Year 2015: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2014: ¥1,820,000 (Direct Cost: ¥1,400,000、Indirect Cost: ¥420,000); Fiscal Year 2013: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000)
• Keywords: カルシウム恒常性 / NMR / サルコペニア / In-cell NMR / リアノジン受容体

Outline of Final Research Achievements

Ryanodine receptor is the sarcoplasmic reticulum calcium release channel. We tried to investigate the interaction between ryanodine receptor and its stabilizing factor, FKBP12, by in-cell NMR. However, we did not succeed to deliver the protein of interest to myogenic cells. Thus, I changed the originally planned research project for the study focused on the interaction the protein complex (uncoupling protein 3 (UCP3) and HAX-1) that was involved in the control of the calcium influx into the mitochondria. The NMR and CD experiments showed that calcium-induced folding and stabilization of the C-terminal region of HAX-1 enable it to interact with UCP3. Moreover, the NMR experiment using two different detergents suggested that the C-terminal region could bind to biological membrane.

Research Products

• [Journal Article] Capric Acid Up-Regulates UCP3 Expression without PDK4 Induction in Mouse C2C12 Myotubes. (2016)
  • Author(s): Abe T1, Hirasaka K, Kohno S, Tomida C, Haruna M, Uchida T, Ohno(Maita) A, Oarada M, Teshima-Kondo S, Okumura Y, Choi I, Aoyama T, Terao J, Nikawa T.
  • Journal Title: J Nutr Sci Vitaminol (Tokyo). Volume: 62 Pages: 32-39
• [Journal Article] Structural analysis of the TKB domain of ubiquitin ligase Cbl-b complexed with its small inhibitory peptide, Cblin (2016)
  • Author(s): Ohno A, Ochi A, Maita N, Ueji T, Bando A, Nakao R, Hirasaka K, Abe T, Teshima-Kondo S, Nemoto H, Okumura Y, Higashibata A, Yano S, Tochio H, Nikawa T
  • Journal Title: Arch Biochem Biophys Volume: 594 Pages: 1-7
  • DOI: 10.1016/j.abb.2016.02.014
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] UCP3 is associated with Hax-1 in mitochondria in the presence of calcium ion (2016)
  • Author(s): Hirasaka K, Mills EM, Haruna M, Bando A, Ikeda C, Abe T, Kohno S, Nowinski SM, Lago CU, Akagi K, Tochio H, Ohno A, Teshima-Kondo S, Okumura Y, Nikawa T
  • Journal Title: Biochem Biophys Res Commun Volume: 472 Issue: 1 Pages: 108-113
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.02.075
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] 宇宙飛行と加齢による筋萎縮と栄養対策 (2013)
  • Author(s): 坂東亜紀、真板綾子、二川健
  • Journal Title: アンチ・エイジング医学 日本抗加齢医学会雑誌 Volume: 9 Pages: 47-52
• [Presentation] Ⅱ型膜貫通型セリンプロテアーゼMSPLとペプチド性阻害剤との複合体結晶構造解析 (2016)
  • Author(s): 真板綾子、真板宣夫、奥村裕司、永野ひかる、次田早希、有田恭平、田畑孝統、平坂勝也、近藤茂忠、二川健
  • Organizer: 第39回 分子生物学会
  • Place of Presentation: パシフィコ横浜 （神奈川県横浜市）
  • Year and Date: 2016-12-02
• [Presentation] Calcium-Dependent Interaction between UCP3 and HAX-1 (2016)
  • Author(s): Ohno(Maita) A., Tsugita S., Hirasaka K., Haruna M., Ikeda C., Akagi K., Tochio H., Kondo S., Okumura Y., Nikawa T.
  • Organizer: XXIIth ICMRBS
  • Place of Presentation: Kyoto International Conference Center (京都府京都市）
  • Year and Date: 2016-08-21
• [Presentation] 廃用性筋萎縮原因酵素Cbl-bと阻害ペプチドCblinとの複合体 結晶構造解析 (2016)
  • Author(s): 真板綾子、真板宣夫、次田早希、安倍知紀、平坂勝也、奥村裕司、 近藤茂忠、二川健
  • Organizer: 病態プロテアーゼ学会
  • Place of Presentation: 千里ライフサイエンスセンター （大阪府豊中市）
  • Year and Date: 2016-08-05
• [Presentation] 高病原性インフルエンザウィルス感染に関わる宿主酵素MSPLとペプチド性阻害剤の 複合体結晶構造 (2016)
  • Author(s): 真板（大野） 綾子、真板宣夫、奥村裕司、永野ひかる、次田早希、有田恭平、坂東亜紀、田畑考統、平坂勝也、安倍知紀、 近藤茂忠、二川健
  • Organizer: 第16回蛋白質科学会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場 （福岡県福岡市）
  • Year and Date: 2016-06-09
• [Presentation] UCP3 と Hax-1 の相互作用様式の解明 (2016)
  • Author(s): 次田 早希、真板 綾子 、平坂 勝也 、赤木 謙一、杤尾 豪人、安倍 知紀、近藤 茂忠 、奥村 裕司、二川 健
  • Organizer: 第16回蛋白質科学会
  • Place of Presentation: 福岡国際会議場 （福岡県福岡市）
  • Year and Date: 2016-06-07
• [Presentation] HAX-1とUCP3の相互作用様式の解明 (2015)
  • Author(s): 次田早希、真板綾子、平坂勝也、坂下禎宏、井田くるみ、春名真里江、Floriane Rudwill、安倍知紀、近藤茂忠、奥村裕司、二川 健
  • Organizer: 第48回 日本栄養・食糧学会 中国・四国支部大会
  • Place of Presentation: 広島女学院大学(広島県・広島市）
  • Year and Date: 2015-11-01
• [Presentation] UCP3とHAX-1の相互作用様式の解明 (2015)
  • Author(s): 次田早希、平坂勝也、奥村裕司、安倍知紀、真板綾子、近藤茂忠、二川 健
  • Organizer: 第20回 日本病態プロテアーゼ学会学術集会
  • Place of Presentation: ANAクラウンプラザホテルグランコート名古屋 (愛知県・名古屋市）
  • Year and Date: 2015-08-22
• [Presentation] Hax-1とUCP3のカルシウム依存的な相互作用の解析 (2014)
  • Author(s): 真板綾子
  • Organizer: 第14回日本蛋白質科学会
  • Place of Presentation: 横浜産貿ホール マリネリア（神奈川県・横浜市）
  • Year and Date: 2014-06-25 – 2014-06-27
• [Presentation] UCP3結合領域を介したHAX-1とCa2+の相互作用解析 (2013)
  • Author(s): 坂東亜紀、真板綾子、杤尾豪人、前山遥、平坂勝也、池田千佳、春名真里江、近藤茂忠、奥村裕司、二川健
  • Organizer: 第67回日本栄養・食糧学会大会
  • Place of Presentation: 名古屋大学東山キャンパス（愛知県）
• [Presentation] NMR (核磁気共鳴) 法によるUCP3と HAX-1の相互作用解析 (2013)
  • Author(s): 坂東 亜紀、真板 綾子、赤木謙一、杤尾 豪人、湯浅茜、平坂 勝也、池田 千佳、春名 真里江、近藤 茂忠、奥村 裕司、二川 健
  • Organizer: 第14回運動器科学研究会
  • Place of Presentation: ヴィラフォンティーヌ汐留（東京都）