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Elucidating the mechanism by which translation stops and goes without translation initiation and termination factors: use of a translation system reconstituted with human factors

Research Project

Project/Area Number 25660082
Research Category

Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research

Allocation TypeMulti-year Fund
Research Field Applied biochemistry
Research InstitutionUniversity of Hyogo

Principal Investigator

Imataka Hiroaki  兵庫県立大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (50201942)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2016-03-31
Project Status Completed (Fiscal Year 2015)
Budget Amount *help
¥3,900,000 (Direct Cost: ¥3,000,000、Indirect Cost: ¥900,000)
Fiscal Year 2015: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000)
Fiscal Year 2014: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Fiscal Year 2013: ¥1,560,000 (Direct Cost: ¥1,200,000、Indirect Cost: ¥360,000)
Keywords翻訳 / タンパク質合成 / 再構成 / 翻訳開始 / 翻訳終結 / ペプチド鎖伸長 / ウイルスタンパク / 新生ペプチド / 試験管内合成 / 再構成型翻訳系 / タンパク質プロセッシング / ウイルスタンパク質 / セルフリーシステム
Outline of Final Research Achievements

We established an in vitro protein expression system reconstituted human translation factors. When the 2A2B region of encephalomyocarditisvirus was translated with this system, the 2A and 2B proteins were separately generated, indicating that this processing does not require any special factor. Even when eRF1/3 was omitted from this system, the 2A2B processing was observed, suggesting that this processing occurred during the elongation of the peptide by the ribosome J. Biol. Chem. 289: 31960-31971). To further explore the mechanism of this processing, we examined various mutations of the amino acid sequence of the 2A2B region. Notably, when the NPGP sequence was mutated into NPGG or NPGQ, the processing occurred with a high efficiency.

Report

(4 results)
  • 2015 Annual Research Report   Final Research Report ( PDF )
  • 2014 Research-status Report
  • 2013 Research-status Report
  • Research Products

    (26 results)

All 2016 2015 2014 2013

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results,  Open Access: 1 results,  Acknowledgement Compliant: 1 results) Presentation (22 results) (of which Int'l Joint Research: 1 results,  Invited: 5 results) Book (2 results)

  • [Journal Article] Production methods of virus particles2015

    • Author(s)
      Kodai Machida, and Hiroaki Imataka
    • Journal Title

      Biotechnology Letters

      Volume: 37 Issue: 4 Pages: 753-760

    • DOI

      10.1007/s10529-014-1741-9

    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] A translation system reconstituted with human factors proves that processing of encephalomyocarditisvirus proteins 2A and 2B occurs in the elongation phase of translation without eukaryotic release factors2014

    • Author(s)
      Kodai Machida, Satoshi Mikami, Mamiko Masutani, Kurumi Mishima, Tominari Kobayashi, and Hiroaki Imataka
    • Journal Title

      J. Biol. Chem.

      Volume: 289 Issue: 46 Pages: 31960-31971

    • DOI

      10.1074/jbc.m114.593343

    • Related Report
      2014 Research-status Report
    • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
  • [Presentation] 試験管内ウイルス合成2016

    • Author(s)
      町田 幸大、重田 友明、今高 寛晃
    • Organizer
      日本農芸化学会2016年大会シンポジウム
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター (札幌市)
    • Year and Date
      2016-03-28
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Invited
  • [Presentation] ヒト因子由来完全再構成型無細胞翻訳系の樹立2016

    • Author(s)
      重田 友明、町田 幸大、今高 寛晃
    • Organizer
      日本農芸化学会2016年大会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター (札幌市)
    • Year and Date
      2016-03-28
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 翻訳開始因子に依存したヒト由来再構成型翻訳系2015

    • Author(s)
      重田 友明、町田 幸大、石井 陽子、玉越 智也、向田 芳純、今高 寛晃
    • Organizer
      第38回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド (神戸市)
    • Year and Date
      2015-12-01
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] ヒト因子由来再構成型タンパク質合成/フォールディング共役システムによる人工細胞の創出2015

    • Author(s)
      町田 幸大、重田友明、桝本愛、島田将行、湊元幹太、今高 寛晃
    • Organizer
      第38回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド (神戸市)
    • Year and Date
      2015-12-01
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      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 翻訳開始に依存したヒト因子由来再構成型翻訳系の樹立2015

    • Author(s)
      重田 友明、町田 幸大、石井 陽子、玉越 智也、向田 芳純、今高 寛晃
    • Organizer
      細胞を創る研究会8.0
    • Place of Presentation
      大阪大学吹田キャンパス銀杏会館 (吹田市)
    • Year and Date
      2015-11-12
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] ヒトの人工細胞構築に向けたヒト因子由来再構成型翻訳/フォールディング共役系の樹立2015

    • Author(s)
      町田 幸大、重田友明、桝本愛、島田将行、湊元幹太、今高 寛晃
    • Organizer
      細胞を創る研究会8.0
    • Place of Presentation
      大阪大学吹田キャンパス銀杏会館 (吹田市)
    • Year and Date
      2015-11-12
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      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] ヒト因子由来再構成型翻訳系の樹立2015

    • Author(s)
      重田 友明、町田 幸大、石井 陽子、玉越 智也、向田 芳純、今高 寛晃
    • Organizer
      第67回日本生物工学会大会
    • Place of Presentation
      城山観光ホテル(鹿児島市)
    • Year and Date
      2015-10-26
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      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 人工ヒト細胞の創出に向けて2015

    • Author(s)
      町田 幸大、重田友明、桝本愛、島田将行、湊元幹太、今高 寛晃
    • Organizer
      第67回日本生物工学会大会
    • Place of Presentation
      城山観光ホテル(鹿児島市)
    • Year and Date
      2015-10-26
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 翻訳開始因子を含むヒト因子由来完全再構成型翻訳系の樹立2015

    • Author(s)
      重田 友明, 町田 幸大、石井 陽子、玉越 智也、向田 芳純、今高 寛晃
    • Organizer
      第10回無細胞生命科学研究会
    • Place of Presentation
      理化学研究所(横浜市)
    • Year and Date
      2015-10-13
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] ヒトの再構成型タンパク質合成/フォールディング共役系を内在したヒト人工細胞の創出2015

    • Author(s)
      町田 幸大, 重田友明、桝本愛、島田将行、湊元幹太、今高 寛晃
    • Organizer
      第10回無細胞生命科学研究会
    • Place of Presentation
      理化学研究所(横浜市)
    • Year and Date
      2015-10-13
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 翻訳開始を含むヒト因子由来再構成型翻訳システムの樹立:RNAウイルス合成に向けて2015

    • Author(s)
      重田 友明、町田 幸大、石井 陽子、玉越 智也、向田 芳純、今高 寛晃
    • Organizer
      第17回日本RNA学会年会
    • Place of Presentation
      ホテルライフォート札幌(札幌市)
    • Year and Date
      2015-07-15
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] 再構成型翻訳・フォールデイングシステムの樹立:人工ヒト細胞構築に向けて2015

    • Author(s)
      町田 幸大、重田友明、桝本愛、島田将行、湊元幹太、今高 寛晃
    • Organizer
      第17回日本RNA学会年会
    • Place of Presentation
      ホテルライフォート札幌(札幌市)
    • Year and Date
      2015-07-15
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
  • [Presentation] A New Experimental Tool: Translation System Reconstituted with Purified Human Factors2015

    • Author(s)
      Hiroaki Imataka, Kodai Machida and Tomoaki Shigeta
    • Organizer
      Protein & Peptide Conference 2015
    • Place of Presentation
      Nanjing International Youth Conference Hotel  (南京、中国)
    • Year and Date
      2015-04-25
    • Related Report
      2015 Annual Research Report
    • Int'l Joint Research / Invited
  • [Presentation] 真核細胞のコトランスレーショナル、ポストトランスレーショナルなイベンの解析: 再構成型タンパク質合成システムを用いて2014

    • Author(s)
      今高 寛晃 町田幸大
    • Organizer
      第87回日本生化学会
    • Place of Presentation
      京都国際会議場 (京都市)
    • Year and Date
      2014-10-15 – 2014-10-18
    • Related Report
      2014 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] ヒト因子由来再構成型タンパク質合成システムを利用したシャペロニンCCTと補因子の相互作用解析2014

    • Author(s)
      町田幸大, 今高 寛晃
    • Organizer
      第9回無細胞生命科学研究会
    • Place of Presentation
      大阪大学医学部銀杏会館 (吹田市)
    • Year and Date
      2014-10-08 – 2014-10-09
    • Related Report
      2014 Research-status Report
  • [Presentation] 試験管内ウイルス合成2014

    • Author(s)
      今高 寛晃 町田幸大
    • Organizer
      第66回生物工学会
    • Place of Presentation
      札幌コンベンションセンター (札幌市)
    • Year and Date
      2014-09-09 – 2014-09-11
    • Related Report
      2014 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] 真核細胞のタンパク質合成2014

    • Author(s)
      今高 寛晃
    • Organizer
      ポリアミンと核酸の共進化  第13回 シンポジウム
    • Place of Presentation
      東京慈恵会医科大学 (東京 港区)
    • Year and Date
      2014-06-28
    • Related Report
      2014 Research-status Report
    • Invited
  • [Presentation] ヒト因子由来再構成型タンパク質合成システムの開発と応用2014

    • Author(s)
      町田幸大, 今高 寛晃
    • Organizer
      第61回日本生化学会近畿支部例会
    • Place of Presentation
      京都産業大学 (京都市)
    • Year and Date
      2014-05-30
    • Related Report
      2014 Research-status Report
  • [Presentation] 終止コドンも開始コドンも必要としない翻訳終結と再開始: ヒト因子由来再構成型翻訳システムを用いた解析2013

    • Author(s)
      町田幸大
    • Organizer
      第15回日本RNA学会
    • Place of Presentation
      愛媛県民文化会館
    • Related Report
      2013 Research-status Report
  • [Presentation] ヒト因子由来再構成型タンパク質合成装置:ウイルス合成に向けて2013

    • Author(s)
      今高寛晃
    • Organizer
      細胞を創る研究会6.0
    • Place of Presentation
      鶴岡市先端研究産業支援センタ-
    • Related Report
      2013 Research-status Report
  • [Presentation] 標準的なコドンを必要としないタンパク質合成の終結と再開始:ヒト因子由来再構成型翻訳系を利用した解析2013

    • Author(s)
      町田幸大
    • Organizer
      第8回無細胞生命科学研究会
    • Place of Presentation
      新潟大学中央図書館
    • Related Report
      2013 Research-status Report
  • [Presentation] 標準的なコドンを必要としないタンパク質合成の終結と再開始:ヒト因子由来再構成型翻訳系を利用した解析2013

    • Author(s)
      町田幸大
    • Organizer
      第36回 日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド
    • Related Report
      2013 Research-status Report
  • [Book] Human cell extract-derived cell-free systems for virus synthesis. In: Alexandrov,K. and Johnston,W.A. (Eds.), Methods in Molecular Biology 1118, Cell-free protein synthesis: Methods and Protocols2014

    • Author(s)
      Tominari Kobayashi, Kodai Machida and Hiroaki Imataka
    • Total Pages
      7
    • Publisher
      Humana Press,
    • Related Report
      2014 Research-status Report
  • [Book] Cell-free protein synthesis: Methods and Protocols.2013

    • Author(s)
      Tominari Kobayashi, Kodai Machida and Hiroaki Imataka
    • Total Pages
      7
    • Publisher
      Humana Press
    • Related Report
      2013 Research-status Report

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Published: 2014-07-25   Modified: 2019-07-29  

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