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細胞核由来DNAによる自然免疫応答賦活化の可能性についての検討

Research Project

Project/Area Number 25870038
Research Category

Grant-in-Aid for Young Scientists (B)

Allocation TypeMulti-year Fund
Research Field Respiratory organ internal medicine
Pathological medical chemistry
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

柳澤 悟  東北大学, 大学病院, 助教 (50433363)

Project Period (FY) 2013-04-01 – 2014-03-31
Project Status Discontinued (Fiscal Year 2013)
Budget Amount *help
¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000)
Fiscal Year 2015: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2014: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
Fiscal Year 2013: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
KeywordsToll Like Receptor 9 / COPD / PAMP / DAMP / DNAメチル化
Research Abstract

今回、代表者は「DNAメチル化阻害薬によって細胞核DNAメチル化が減少すると炎症が惹起されるのか」、逆に「炎症反応時のエピジェネティックな反応により非メチル化DNAが増えると同じような結果が得られるか」について末梢血由来好中球を用いて検討を行った。
1.まずPolymorphprepを用いることで末梢血からの好中球回収率/生存率が上がることをMTT assayや細胞染色により確認した。またDNAをDAMPとして認識するToll-Like Receptor 9 (TLR9)が好中球に発現していることをWestern blottingにより確認した。このうえでTLR9アゴニストであるODN2395を好中球に添加し、陽性コントロールとしての好中球活性化を確認した。TLR9刺激はNF-κBを介してInterleukin-8(IL-8)産生を促すことが以前に報告されており、実際にODN2395添加によりIL-8産生亢進が確認された。
2.次に、DNAメチル化阻害薬であるRG108単独刺激による細胞応答性の変化についてIL-8を指標に評価した。MTT assayによると24時間のRG108刺激(0~100μM)で好中球のViabilityに影響はなかったが、RG108の濃度が高くになるほどIL-8産生は低下した。この傾向は、好中球を活性化するLipopolysaccharideの前刺激で顕著となり、DNAメチル化の程度が炎症反応に影響することを示唆した。
3.上記の反応は、TLR9のアゴニストであるODN2395の前投与により減弱した。すなわちODN2395の前投与によりTLR9刺激系を飽和しておくとRG108によるDNAメチル化阻害は炎症惹能を発揮できないことがわかった。
4.今後の検討課題としては(1)炎症の場で実際にDNAメチル化酵素の発現や活性が変化していること、加えて(2)TLR9刺激系のMain Sourceが核由来DNAであることを確認する必要がある。

Report

(1 results)
  • 2013 Annual Research Report
  • Research Products

    (6 results)

All 2014 2013 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 1 results) Presentation (2 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] コントロール不良 : 喘息合併・頻回の増悪 : 吸入ステロイドと喀痰調整薬の意義 (特集 段階に応じたCOPD薬物治療)2014

    • Author(s)
      柳澤 悟 , 一ノ瀬 正和
    • Journal Title

      日本医事新報

      Volume: 4681 Pages: 35-39

    • NAID

      40019940523

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    • Author(s)
      Yanagisawa S, Inoue A, Koarai A, Ono M, Tamai T, Ichinose M.
    • Journal Title

      J Thorac Oncol.

      Volume: 8

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    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] COPD治療と全身併存症の改善2013

    • Author(s)
      柳澤悟, 一ノ瀬正和
    • Journal Title

      新興医学出版社

      Volume: 11 Pages: 1408-1412

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    • Author(s)
      山田充啓,岡崎達馬,柳澤 悟,宍倉 裕,竹越大輔,一ノ瀬正和
    • Organizer
      第201回日本内科学会東北地方会例会
    • Place of Presentation
      宮城県仙台市
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    • Author(s)
      井上 彰, 柳澤 悟, 小荒井 晃, 一ノ瀬 正和
    • Organizer
      第52回日本肺癌学会東北支部会
    • Place of Presentation
      岩手県奥州市
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  • [Remarks] 東北大学大学院医学系研究科内科病態学講座呼吸器内科学分野

    • URL

      http://www.rm.med.tohoku.ac.jp/index.html

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Published: 2014-07-25   Modified: 2019-07-29  

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