細胞核由来DNAによる自然免疫応答賦活化の可能性についての検討

• Project/Area Number: 25870038
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Respiratory organ internal medicine; Pathological medical chemistry
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 柳澤 悟 東北大学, 大学病院, 助教 (50433363)
• Project Period (FY): 2013-04-01 – 2014-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2013)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2015: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2014: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2013: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
• Keywords: Toll Like Receptor 9 / COPD / PAMP / DAMP / DNAﾒﾁﾙ化

Research Abstract

今回、代表者は「DNAﾒﾁﾙ化阻害薬によって細胞核DNAﾒﾁﾙ化が減少すると炎症が惹起されるのか」、逆に「炎症反応時のｴﾋﾟｼﾞｪﾈﾃｨｯｸな反応により非ﾒﾁﾙ化DNAが増えると同じような結果が得られるか」について末梢血由来好中球を用いて検討を行った。
1.まずPolymorphprepを用いることで末梢血からの好中球回収率/生存率が上がることをMTT assayや細胞染色により確認した。またDNAをDAMPとして認識するToll-Like Receptor 9 (TLR9)が好中球に発現していることをWestern blottingにより確認した。このうえでTLR9ｱｺﾞﾆｽﾄであるODN2395を好中球に添加し、陽性ｺﾝﾄﾛｰﾙとしての好中球活性化を確認した。TLR9刺激はNF-κBを介してInterleukin-8(IL-8)産生を促すことが以前に報告されており、実際にODN2395添加によりIL-8産生亢進が確認された。
2.次に、DNAﾒﾁﾙ化阻害薬であるRG108単独刺激による細胞応答性の変化についてIL-8を指標に評価した。MTT assayによると24時間のRG108刺激(0～100μM)で好中球のViabilityに影響はなかったが、RG108の濃度が高くになるほどIL-8産生は低下した。この傾向は、好中球を活性化するLipopolysaccharideの前刺激で顕著となり、DNAﾒﾁﾙ化の程度が炎症反応に影響することを示唆した。
3.上記の反応は、TLR9のｱｺﾞﾆｽﾄであるODN2395の前投与により減弱した。すなわちODN2395の前投与によりTLR9刺激系を飽和しておくとRG108によるDNAﾒﾁﾙ化阻害は炎症惹能を発揮できないことがわかった。
4.今後の検討課題としては(1)炎症の場で実際にDNAﾒﾁﾙ化酵素の発現や活性が変化していること、加えて(2)TLR9刺激系のMain Sourceが核由来DNAであることを確認する必要がある。

Research Products

• [Journal Article] コントロール不良 : 喘息合併・頻回の増悪 : 吸入ステロイドと喀痰調整薬の意義 (特集 段階に応じたCOPD薬物治療) (2014)
  • Author(s): 柳澤 悟 , 一ノ瀬 正和
  • Journal Title: 日本医事新報 Volume: 4681 Pages: 35-39
  • NAID: 40019940523
• [Journal Article] Successful crizotinib retreatment after crizotinib-induced interstitial lung disease. (2013)
  • Author(s): Yanagisawa S, Inoue A, Koarai A, Ono M, Tamai T, Ichinose M.
  • Journal Title: J Thorac Oncol. Volume: 8
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] COPD治療と全身併存症の改善 (2013)
  • Author(s): 柳澤悟, 一ノ瀬正和
  • Journal Title: 新興医学出版社 Volume: 11 Pages: 1408-1412
• [Presentation] 結核性胸膜炎・形質細胞腫との鑑別を要した、IgG4関連疾患による胸水貯留の１症例 (2014)
  • Author(s): 山田充啓，岡崎達馬，柳澤 悟，宍倉 裕，竹越大輔，一ノ瀬正和
  • Organizer: 第201回日本内科学会東北地方会例会
  • Place of Presentation: 宮城県仙台市
• [Presentation] 血小板減少性紫斑病（ITP）合併肺癌に対して放射線治療が奏功した1例 (2013)
  • Author(s): 井上 彰, 柳澤 悟, 小荒井 晃, 一ノ瀬 正和
  • Organizer: 第52回日本肺癌学会東北支部会
  • Place of Presentation: 岩手県奥州市
• [Remarks] 東北大学大学院医学系研究科内科病態学講座呼吸器内科学分野
  • URL: http://www.rm.med.tohoku.ac.jp/index.html