CRISPRスクリーニングを用いたY染色体喪失機構の解明

• Project/Area Number: 25K19434
• Research Category: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Review Section: Basic Section 53020:Cardiology-related
• Research Institution: National Cardiovascular Center Research Institute
• Principal Investigator: 吉田 尚史 国立研究開発法人国立循環器病研究センター, 研究所, 室長 (00846321)
• Project Period (FY): 2025-04-01 – 2027-03-31
• Project Status: Granted (Fiscal Year 2025)
• Budget Amount: ¥4,160,000 (Direct Cost: ¥3,200,000、Indirect Cost: ¥960,000); Fiscal Year 2026: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000); Fiscal Year 2025: ¥2,470,000 (Direct Cost: ¥1,900,000、Indirect Cost: ¥570,000)
• Keywords: 体細胞変異 / Y染色体喪失 / CRISPRスクリーニング

Outline of Research at the Start

本研究では、Cas9を発現したY染色体レポータマウスから単離するマウス胎児線維芽細胞（MEF)を用いてゲノムワイドCRISPRスクリーニングを行う。採取したMEFにレンチウイルスgRNAライブラリを感染させ、1細胞あたり1つの遺伝子が欠損したMEFプール細胞を作製する。感染14日後、LOY細胞をセルソーターにより単離する。単離したLOY細胞のゲノム上のsgRNA配列を次世代シークエンサーを用いて解析する。mLOYの候補遺伝子を得た後は、それぞれの遺伝子をノックアウトしたMEFを樹立し、LOYが認められるか、検証を行う。これにより、どの遺伝子がY染色体喪失を直接的に制御しているかについて明らかとできる。