遺伝子組換え技術と遺伝子発現の理解のための参加型公開実験ワークショップ手法の研究

• Project/Area Number: 26560111
• Research Category: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Science education
• Research Institution: National Institute of Agrobiological Sciences
• Principal Investigator: 渡辺 裕文 国立研究開発法人農業生物資源研究所, 昆虫機能研究開発ユニット, 上級研究員 (10355745)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥3,380,000 (Direct Cost: ¥2,600,000、Indirect Cost: ¥780,000); Fiscal Year 2016: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2015: ¥780,000 (Direct Cost: ¥600,000、Indirect Cost: ¥180,000); Fiscal Year 2014: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: シロアリ / 唾液腺 / セルラーゼ / 無細胞発現系 / 遺伝子組換え / 組換え生産 / 体験 / ウサギ網状赤血球 / ｃDNA

Outline of Annual Research Achievements

ヤマトシロアリ(Reticulitermes speratus)ワーカーを材料として唾液腺セルラーゼの無細胞発現系を構築した。すなわちヤマトシロアリワーカー（働きアリ）全虫体よりオリゴｄTセルロースによるアフィニティ法によりｍRNAを精製し、これを鋳型として第１アンカー配列を5’端に接続したオリゴｄTプライマーと第２アンカー配列を5’端に接続したスイッチングテンプレートを加えたMMLV由来逆転写酵素系によるfirst strand cDNA合成をおこなう。得られたｍRNAを鋳型としてヤマトシロアリ唾液腺セルラーゼ（GenBank AB008778）の成熟タンパクゴード領域のN末端に特異的塩基配列の5’端にウサギ網状赤血球無細胞発現系での発現に必要な転写開始配列を加えたプライマーおよびC末端特異的塩基配列および終止コドンの相補配列によるプライマー間で唾液腺セルラーゼｃDNAを特異的に増幅し、それを鋳型としてウサギ網状赤血球無細胞系でヤマトシロアリ唾液腺セルラーゼが発現する系を構築した。唾液腺セルラーゼの発現はシロアリ内源性セルラーゼに特異的な抗血清による免疫反応とセルラーゼ活性の両方で確認した。（以上平成２６年度研究成果、２７年度は研究費の申請自粛、２８年度は研究課題の廃止により実施していない）