Development of a method for phosphorylation signaling

• Project/Area Number: 26750372
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Chemical biology
• Research Institution: Kagawa University
• Principal Investigator: Sugiyama Yasunori 香川大学, 農学部, 助教 (10632599)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2017-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2016)
• Budget Amount: ¥3,770,000 (Direct Cost: ¥2,900,000、Indirect Cost: ¥870,000); Fiscal Year 2016: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000); Fiscal Year 2015: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2014: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,000,000、Indirect Cost: ¥300,000)
• Keywords: リン酸化シグナリング / プロテインキナーゼ / マルチPK抗体 / Phos-tag / プロテオミクス / 二次元電気泳動 / リン酸化プロテオーム / 細胞分化 / Phos-tag SDS-PAGE / 抗がん剤 / リン酸化シグナル / タンパク質リン酸化

Outline of Final Research Achievements

To analyze expression and phosphorylation state of cellular protein kinases, we developed new method using Multi-PK antibodies and Phos-tag techniques. Analysis using human promyelocytic leukemia HL-60 cells, we identified and detected protein kinase involved in resistance of anticancer agent and differentiation. Our present study revealed that the new methods can be used for the elucidating of biological phenomena and disease pathogenesis through analysis of intracellular protein kinases.

Research Products

• [Journal Article] Subcellular distribution of cyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5) is regulated through phosphorylation by dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A (DYRK1A) (2017)
  • Author(s): Ami Oi, Syouichi Katayama, Naoya Hatano, Yasunori Sugiyama, Isamu Kameshita, Noriyuki Sueyoshi
  • Journal Title: Biochemical and Biophysical Research Communications Volume: 482 Issue: 2 Pages: 239-245
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.11.048
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] マルチPK抗体を利用したプロテインキナーゼ研究 (2017)
  • Author(s): 杉山 康憲、亀下 勇
  • Journal Title: 電気泳動 Volume: 61
  • NAID: 130005863670
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Suppression of miR-7 biogenesis by NF90-NF45 controls cell proliferation in hepatocellular carcinoma. (2016)
  • Author(s): Higuchi T, Todaka H, Sugiyama Y, Ono M, Tamaki N, Hatano E, Takezaki Y, Hanazaki K, Miwa T, Chin See LS, Morisawa K, Tsuda M, Taniguchi T, Sakamoto S
  • Journal Title: J Biol Chem Volume: 291 Issue: 40 Pages: 21074-21084
  • DOI: 10.1074/jbc.m116.748210
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Phosphorylated TandeMBP: A unique protein substrate for protein phosphatase assay (2016)
  • Author(s): Yasunori Sugiyama, Sho Yamashita, Yuuki Uezato, Yukako Senga, Syouichi Katayama, Naoki Goshima, Yasushi Shigeri, Noriyuki Sueyoshi, Isamu Kameshita
  • Journal Title: Analytical Biochemistry Volume: 513 Pages: 47-53
  • DOI: 10.1016/j.ab.2016.08.020
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Expression analyses of splice variants of zebrafish cyclin-dependent kinase-like 5 and its substrate, amphiphysin 1 (2016)
  • Author(s): Syouichi Katayama, Yukako Senga, Ami Oi, Yosuke Miki, Yasunori Sugiyama, Noriyuki Sueyoshi, Isamu Kameshita
  • Journal Title: Gene Volume: 583 Issue: 1 Pages: 15-23
  • DOI: 10.1016/j.gene.2016.02.036
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Overexpression of NF90-NF45 represses myogenic microRNA biogenesis, developing skeletal muscle atrophy and centronuclear muscle fibers (2015)
  • Author(s): Hiroshi Todaka, Takuma Higuchi, Ken-ichi Yagyu, Yasunori Sugiyama, Fumika Yamaguchi, Keiko Morisawa, Masafumi Ono, Atsuki Fukushima, Masayuki Tsuda, Taketoshi Taniguchi, Shuji Sakamoto
  • Journal Title: Molecular and Cellular Biology Volume: 35 Issue: 13 Pages: 2295-2308
  • DOI: 10.1128/mcb.01297-14
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Cell-based inhibitor screening identifies multiple protein kinases important for circadian clock oscillations (2015)
  • Author(s): Naohiro Kon, Yasunori Sugiyama, Hikari Yoshitane, Isamu Kameshita, Yoshitaka Fukada
  • Journal Title: Communicative & Integrative Biology Volume: 8 Issue: 4 Pages: 1-4
  • DOI: 10.4161/19420889.2014.982405
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] マルチPK抗体とPhos-tagを利用した細胞内リン酸化動態の新規解析法 (2015)
  • Author(s): 杉山 康憲、亀下 勇、坂本 修士
  • Journal Title: 生物物理化学 Volume: 59 Pages: 82-84
  • NAID: 130005103931
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Expression and phosphorylation state analysis of intracellular protein kinases using Multi- PK antibody and Phos- tag SDS- PAGE. (2015)
  • Author(s): Sugiyama, Y., Katayama, S., Kameshita, I., Morisawa, K., Higuchi, T., Todaka, H., Eiji Kinoshita, Kinoshita- Kikuta, E., Koike, T., Taniguchi, T., Sakamoto, S.
  • Journal Title: MethodsX Volume: 2 Pages: 469-474
  • DOI: 10.1016/j.mex.2015.11.007
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] CaMKII is essential for the cellular clock and coupling between morning and evening behavioral rhythms. (2014)
  • Author(s): Kon N, Yoshikawa T, Honma S, Yamagata Y, Yoshitane H, Shimizu K, Sugiyama Y, Hara C, Kameshita I, Honma K, Fukada Y.
  • Journal Title: Genes Dev Volume: 28 Issue: 10 Pages: 1101-1110
  • DOI: 10.1101/gad.237511.114
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] 液相等電点泳動を用いた二次元電位泳動法の活用 (2014)
  • Author(s): 杉山 康憲、片山 将一、馬場 裕美、末吉 紀行、亀下 勇
  • Journal Title: 生物物理化学 Volume: 58 Pages: 56-58
• [Presentation] がん部におけるmiRNAを介したNF90-NF45の発現制御 (2016)
  • Author(s): 樋口 琢磨、森澤 啓子、Lai Sylvia Chin See、三輪 武司、池 恩燮、戸高 寛、杉山 康憲、津田 雅之、坂本修士
  • Organizer: 第39回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-11-30
• [Presentation] 二本鎖RNA結合タンパク質NF90-NF45の発現増加は生体における造腫瘍能を上昇させる (2016)
  • Author(s): 樋口 琢磨、三輪 武司、延本 篤也、森澤 啓子、Lai Sylvia Chin See、池 恩燮、戸高 寛、杉山 康憲、津田 雅之、坂本修士
  • Organizer: 第39回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-11-30
• [Presentation] 慢性的な高グルコースによるインスリン分泌細胞INS-1内のコレステロールの増加はインスリン発現の障害を誘導する (2016)
  • Author(s): 藤井 修作、戸髙 寛、樋口 琢磨、坂本 修士、村尾 孝児、杉山 康憲
  • Organizer: 第39回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-11-30
• [Presentation] 膵島b細胞において内在性RNA結合タンパク質NF45が有する新たな細胞制御作用 (2016)
  • Author(s): Sylvia Lai, 樋口 琢磨、津田 雅之、森澤 啓子、杉山 康憲、三輪 武司、戸髙 寛、坂本 修士
  • Organizer: 第39回日本分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2016-11-30
• [Presentation] Cultivation of some edible mushrooms on the sawdust medium supplemented with rare sugars (2016)
  • Author(s): Issei Yoshino, Makoto kawate, Mayu Onodera, Rina Takaoka, Yasunori Sugiyama, Akira Watanabe, Akihide Yoshihara, Ken Izumori, Yasuhiko Asada
  • Organizer: The 6th Symposium of International Society of Rare Sugars
  • Place of Presentation: Kagawa
  • Year and Date: 2016-11-24
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] マルチPK抗体：プロテインキナーゼを幅広く認識できる解析ツール (2016)
  • Author(s): 杉山 康憲、亀下 勇
  • Organizer: 第67回日本電気泳動学会総会
  • Place of Presentation: 北海道
  • Year and Date: 2016-08-26
  • Invited
• [Presentation] Elucidation of the role of the doublestranded RNA binding protein NF90-NF45 complex in muscular regeneration (2016)
  • Author(s): Hiroshi Todaka, Takuma Higuchi, Keiko Morisawa, Takeshi Miwa, Lai Sylvia Chin See, Masayuki Tsuda, Yasunori Sugiyama, Mikihiko Arikawa, Takayuki Sato, Shuji Sakamoto
  • Organizer: RNA2016
  • Place of Presentation: Kyoto
  • Year and Date: 2016-06-28
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] 脱リン酸化解析用タンパク質基質（リン酸化TandeMBP）の開発 (2016)
  • Author(s): 上里 裕樹、山下 翔、千賀 由佳子、片山 将一、五島 直樹、茂里 康、末吉 紀行、亀下 勇、杉山 康憲
  • Organizer: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 高知
  • Year and Date: 2016-05-27
• [Presentation] 2型糖尿病の糖毒性に関わるリン酸化シグナル因子の同定と解析 (2016)
  • Author(s): 井戸 彩詠、樋口 琢磨、戸髙 寛、坂本 修士、村尾 孝児、杉山 康憲
  • Organizer: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 高知
  • Year and Date: 2016-05-27
• [Presentation] 膵臓ランゲルハンス島におけるRNA結合タンパク質が有する新たな細胞制御作用 (2016)
  • Author(s): Lai Sylvia Chin See、樋口 琢磨、杉山 康憲、森澤 啓子、三輪 武司、戸高 寛、津田 雅之、坂本 修士
  • Organizer: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 高知
  • Year and Date: 2016-05-27
• [Presentation] 造腫瘍能における二本鎖RNA結合蛋白質複合体NF90-NF45の影響 (2016)
  • Author(s): 樋口 琢磨、戸高 寛、三輪 武司、森澤 啓子、Sylvia Lai Chin See、小野 正文、杉山 康憲、津田 雅之、坂本 修士
  • Organizer: 第57回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 高知
  • Year and Date: 2016-05-27
• [Presentation] 膵臓における二本鎖RNA結合タンパク質NF90及びNF45の機能解析 (2015)
  • Author(s): Lai Sylvia Chin See, 樋口 琢磨、杉山 康憲、森澤 啓子、戸髙 寛、三輪 武司、津田 雅之、坂本 修士
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] 担子菌Coprinopsis cinereaの成長菌糸に存在するCaMキナーゼ(CoPK02)の性質 (2015)
  • Author(s): 山下 雅史、片山 将一、千賀 由佳子、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] 抗がん剤を処理したヒト白血病細胞HL-60の細胞内キナーゼの発現およびリン酸化動態の解析 (2015)
  • Author(s): 杉山 康憲、片山 将一、亀下 勇、森澤 啓子、樋口 琢磨、戸髙 寛、木下 英司、木下 恵美子、小池 透、坂本 修士
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] Dual specificity tyrosine-phosphorylation-regulated kinase 1A（DYRK１A）によるCyclin-dependent kinase-like 5（CDKL5）のリン酸化とその意義 (2015)
  • Author(s): 大井 愛海、片山 将一、三木 洋祐、波多野 直哉、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] Ca2+/CaM-dependent protein kinase I (CaMKI) によるDistal-less homeobox 1 (Dlx1) のリン酸化とオステオカルシンの転写制御 (2015)
  • Author(s): 秋月 一駿、千賀 由佳子、杉山 康憲、亀下 勇、末吉 紀行
  • Organizer: BMB2015
  • Place of Presentation: 神戸
  • Year and Date: 2015-12-01
• [Presentation] マルチPK抗体とPhos-tagを利用した細胞内リン酸化動態の新規解析法 (2015)
  • Author(s): 杉山 康憲、亀下 勇、坂本 修士
  • Organizer: 第６６回日本電気泳動学会総会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-09-04
  • Invited
• [Presentation] Multi-PTK Antibody: A Powerful Tool to Detect a Wide Variety of Protein Tyrosine Kinases (PTKs) (2015)
  • Author(s): Isamu Kameshita, Noriyuki Sueyoshi, Yasunori Sugiyama
  • Organizer: The 29th Annual Symposium of The Protein Society
  • Place of Presentation: スペイン、バルセロナ
  • Year and Date: 2015-07-22
  • Int'l Joint Research
• [Presentation] Rett症候群の発症に関わるCyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5)のアミノ酸変異と基質リン酸化活性 (2015)
  • Author(s): 大井 愛海、片山 将一、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • Organizer: 第56回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 島根
  • Year and Date: 2015-05-29
• [Presentation] カルモジュリン依存性プロテインキナーゼIアイソフォーム(CaMKIgとCaMKIg)の自己リン酸化に着目した比較解析 (2015)
  • Author(s): 秋月 一駿、千賀 由佳子、杉山 康憲、亀下 勇、末吉 紀行
  • Organizer: 第56回日本生化学会中国・四国支部例会
  • Place of Presentation: 島根
  • Year and Date: 2015-05-29
• [Presentation] マウス肝臓の概日時計を制御する転写因子複合体のプロテオミクス解析 (2014)
  • Author(s): 広瀬 健太郎、杉山 康憲、吉種 光、秦（小塚） 裕子、尾山 大明、深田 吉孝
  • Organizer: 第37回分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2014-11-27
• [Presentation] Ca2+/CaM-dependent protein kinase I (CaMKI)によるDistal-less homeobox 1 (Dlx1)を介した骨形成メカニズム (2014)
  • Author(s): 千賀 由佳子、杉山 康憲、亀下 勇、末吉 紀行
  • Organizer: 第37回分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2014-11-25
• [Presentation] ゼブラフィッシュに存在する2種類のCyclin-dependent kinase-like 5 (CDKL5)のスプライスバリアントの比較解析 (2014)
  • Author(s): 片山 将一、千賀 由佳子、大井 愛海、三木 洋祐、杉山 康憲、末吉 紀行、亀下 勇
  • Organizer: 第37回分子生物学会年会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2014-11-25
• [Presentation] 液相等電点泳動を用いた二次元電気泳動法の活用 (2014)
  • Author(s): 杉山 康憲、片山 将一、馬場 裕美、末吉 紀行、亀下 勇
  • Organizer: 第６５回日本電気泳動学会総会
  • Place of Presentation: 横浜
  • Year and Date: 2014-10-25
  • Invited
• [Presentation] Ca2+/CaM-dependent protein kinase I (CaMKI) regulates Distal-less homeobox 1 (Dlx1) during osteogenic signaling (2014)
  • Author(s): Yukako Senga, Yasunori Sugiyama, Isamu Kameshita, Noriyuki Sueyoshi
  • Organizer: The 15th IUBMB-24th FAOBMB-TSBMB Conference
  • Place of Presentation: 台湾
  • Year and Date: 2014-10-23
• [Presentation] Roles of CaMKII in circadian clock system (2014)
  • Author(s): Naohiro Kon, Tomoko Yoshikawa, Sato Honma, Yoko Yamagata, Hikari Yoshitane, Kimiko Shimizu, Yasunori Sugiyama, Chihiro Hara, Isamu Kameshita, Kenichi Honma, Yoshitaka Fukada
  • Organizer: 第８７回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2014-10-18
  • Invited
• [Presentation] マルチPK抗体とPhos-tagを利用した細胞内リン酸化シグナリング解析法 (2014)
  • Author(s): 杉山 康憲、森澤 啓子、樋口 琢磨、戸高 寛、山口 史佳、安東 徳子、坂本 修士
  • Organizer: 第８７回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2014-10-17
• [Presentation] 二本鎖RNA結合タンパク質が関与する肝細胞癌の新たな遊走能制御 (2014)
  • Author(s): 樋口 琢磨、安東 徳子、三輪 武司、戸高 寛、森澤 啓子、Lai Chin See Sylvia, 杉山 康憲、津田 雅之、坂本 修士
  • Organizer: 第８７回日本生化学会大会
  • Place of Presentation: 京都
  • Year and Date: 2014-10-17
• [Book] 実験医学、Opinion (2015)
  • Author(s): 豊田 優、馬谷 千恵、杉山 康憲
  • Total Pages: 152
  • Publisher: 羊土社
• [Book] これだけ！ 生化学 (2014)
  • Author(s): 有澤 琴子、馬谷 千恵、大上 雅史、小野田 淳人、香川 璃奈、杉山 康憲、高橋 裕佳、瀧慎太郎、道喜 慎太郎、豊田 優、藤原 慶
  • Total Pages: 291
  • Publisher: 秀和システム