SLCO2A1遺伝子変異による小腸潰瘍症のメカニズム追究

• Project/Area Number: 26860524
• Research Category: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• Allocation Type: Multi-year Fund
• Research Field: Gastroenterology
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 島村 克好 慶應義塾大学, 医学部, 特任助教 (00573528)
• Project Period (FY): 2014-04-01 – 2016-03-31
• Project Status: Discontinued (Fiscal Year 2015)
• Budget Amount: ¥3,770,000 (Direct Cost: ¥2,900,000、Indirect Cost: ¥870,000); Fiscal Year 2016: ¥910,000 (Direct Cost: ¥700,000、Indirect Cost: ¥210,000); Fiscal Year 2015: ¥1,170,000 (Direct Cost: ¥900,000、Indirect Cost: ¥270,000); Fiscal Year 2014: ¥1,690,000 (Direct Cost: ¥1,300,000、Indirect Cost: ¥390,000)
• Keywords: 非特異性多発性小腸潰瘍症 / SLCO2A1

Outline of Annual Research Achievements

1.正常および変異型強制発現細胞株の樹立
遺伝子の完全長cDNAクローンー005630.1を哺乳類細胞発現べクターpCMV6-ACにサプクローニングした.完成した正常型の発現べクターに対して各変異型になるよう設計したプライマーによるinversePCRを行うことで患者に認められる全ての変異型の発現べクターを作製た.Humanembryonickidney293(HEK293)培養細胞に遺伝子導入試薬を用いてこれらべクターをトランスフェクションし、48時間培養後実験に供した.
2.強制発現株を用いた正常およひ変異型SLC02A1のPGE輸送機能の解析
正常および変異型SLCO2A1遺伝子を発現させたHEK細胞に,3H標識されたPGEを取り込ませ,一定時間培養後に細胞を溶解して液体シンチレータと混合,液体シンチレーションカウンター(パーキンエルマーTri-Carb3100)で放射線をカウントすることでPGEの輸送能を測定した.正型遺伝子を発現させたHEK細胞と比較して,変異型SLC02A1遺伝子を発現させたHEK細胞では著しくPGEの輸送能が低かった.
3.Cre-loxPシステムを用いた血管内皮特異的slco2a1欠損マウスの作製KnockoutMouseProject(KOMP)RepositoryよりKOMP-CSD ID:79483を人手し,loxP系統を得た.これをVE-Cadherin-Cre系統と交配中である.血管内皮特異的slco2a1欠損マウス系統を樹立した.

Research Products

• [Journal Article] A Hereditary Enteropathy Caused by Mutations in the SLCO2A1 Gene, Encoding a Prostaglandin Transporter. (2015)
  • Author(s): Umeno J, Hisamatsu T, Esaki M, Atsushi Hirano A, Kubokura N, Asano K, Kochi S, Yanai S, Fuyuno Y, Shimamura K, Hosoe N, Ogata H, Watanabe T, Aoyagi K, Ooi H, Watanabe K, Yasukawa S, Hirai F, Matsui T, Iida M, Yao T, Hibi T, Kosaki K, Kanai T, Kitazono T, Matsumoto T.
  • Journal Title: PLoS Genetics Volume: Nov 5;11(11): Issue: 11 Pages: 1-15
  • DOI: 10.1371/journal.pgen.1005581
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant