免疫レセプターTREM1のリガンド同定と敗血症制御への応用

• Project/Area Number: 26893063
• Research Category: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Immunology
• Research Institution: Tokyo Medical and Dental University
• Principal Investigator: 山西 吉典 東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (10735244)
• Project Period (FY): 2014-08-29 – 2015-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2014)
• Budget Amount: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000); Fiscal Year 2014: ¥1,430,000 (Direct Cost: ¥1,100,000、Indirect Cost: ¥330,000)
• Keywords: 免疫学 / 免疫レセプター

Outline of Annual Research Achievements

本研究の目的を達成するため、平成２６年度は以下の研究計画を遂行した。
１、未知のTREM1リガンドを同定するため、レトロウイルスを用いた発現クローニングを行った。まずTREM1-Fc融合キメラ蛋白を用いてマウス由来のTREM1リガンド発現細胞を同定し、この細胞からcDNAライブラリーを作製した。得られたcDNAライブラリーをリガンド非発現細胞株にレトロウイルスベクターで導入した。一部の細胞株はライブラリー中に含まれるリガンドのcDNAが導入されることで、リガンド発現細胞へと形質転換するため、この細胞をTREM1-Fcの結合を指標にソーティングした。こうして得られた細胞株のゲノムを回収し、導入されたcDNAを解析した結果、TREM1リガンドの候補分子を同定した。
２、得られたリガンド候補分子がTREM1の機能的リガンドとして作用するか検証した。TREM1リガンド候補分子のFc融合蛋白を作製し、可溶性リガンドとしてTREM1の刺激に用いた。また、CHO細胞や293T細胞の細胞表面にTREM1リガンド候補分子を過剰発現させ、膜性リガンドとして利用した。TREM1を発現するマクロファージおよび好中球をエフェクター細胞として用い、可溶性／膜性TREM1リガンド候補分子の刺激によりTREM1に関連したシグナル伝達（ERK, p38, JNK, AKTのリン酸化)や炎症性サイトカイン、ケモカインの産生が誘導されるか検討した。そして、これらの現象が抗TREM1抗体によるTREM1阻害、およびsiRNAによるTREM1のノックダウンによって抑制されるか検証し、リガンド候補分子のTREM1に対する機能的特異性を確認した。

Research Progress Status

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

26年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Journal Article] TREM2 sustains microglial expansion during aging and response to demyelination. (2015)
  • Author(s): Poliani PL, Wang Y, Fontana E, Robinette ML, Yamanishi Y, Gilfillan S, Colonna M.
  • Journal Title: J Clin Invest. Volume: 125 Issue: 5 Pages: 2161-2170
  • DOI: 10.1172/jci77983
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Ceramide-CD300f binding suppresses experimental colitis by inhibiting ATP-mediated mast cell activation. (2015)
  • Author(s): Matsukawa T, Izawa K, Isobe M, Takahashi M, Maehara A, Yamanishi Y, Kaitani A, Okumura K, Teshima T, Kitamura T, Kitaura J
  • Journal Title: Gut Volume: 印刷中 Issue: 5 Pages: 1-11
  • DOI: 10.1136/gutjnl-2014-308900
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Basophils have emerged as a key player in immunity (2014)
  • Author(s): Karasuyama, H., and Yamanishi, Y.
  • Journal Title: Curr. Opin. Immunol. Volume: 31 Pages: 1-7
  • DOI: 10.1016/j.coi.2014.07.004
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] TREM2 mutations implicated in neurodegeneration impair cell surface transport and phagocytosis. (2014)
  • Author(s): Kleinberger G, Yamanishi Y, Suarez-Calvet M, et al.
  • Journal Title: Sci Transl Med. Volume: 6 Issue: 243
  • DOI: 10.1126/scitranslmed.3009093
  • Peer Reviewed
• [Presentation] IL-3 induces the expression of G-protein-coupled receptors on basophils, leading to their infiltration to tick-feeding site. (2014)
  • Author(s): Takuya OHTA, Soichiro YOSHIKAWA, Noriko OKAYAMA, Kenji ISHIWATA, Kayoko YAMAJI, Kayo HORIGUCHI, Lihua LI, Yoshinori YAMANISHI, Hirotaka KANUKA, Naohiro WATANABE, Hajime KARASUYAMA.
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] GM-CSF-elicited basophils have increased capacity for antigen presentation. (2014)
  • Author(s): Kensuke MIYAKE, Toshihisa NAGAO, Yuto YAHAGI, Takumi NUMAZAKI, Soichiro YOSHIKAWA, Yoshinori YAMANISHI, Hajime KARASUYAMA.
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] Establishment of a novel fluorogenic indicator for mast cell degranulation. (2014)
  • Author(s): Kayo HORIGUCHI, Soichiro YOSHIKAWA, Lihua LI, Takuya OHTA, Miesenboeck GERO, Yoshinori YAMANISHI, Hajime KARASUYAMA.
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] Basophil-derived mouse mast cell protease 11 contributes to the development of IgE-mediated chronic allergic inflammation via COX-2. (2014)
  • Author(s): Kensei TANAKA, Misako IKI, Hayato DEKI, Shingo SATO, Soichiro YOSHIKAWA, Yoshinori YAMANISHI, Hajime KARASUYAMA.
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Presentation] Molecular mechanism underlying Ca2+ influx due to IgE/antigen stimulation in basophils. (2014)
  • Author(s): Soichiro YOSHIKAWA, Masatsugu OHORA, Kensuke MIYAKE, Lihua LI, Kayo HORIGUCHI, Takuya OHTA, Takahiro ADACHI, Yoshinori YAMANISHI, Hajime KARASUYAMA.
  • Organizer: 第43回日本免疫学会学術集会
  • Place of Presentation: 国立京都国際会館（京都）
  • Year and Date: 2014-12-10 – 2014-12-12
• [Remarks]
  • URL: http://immune-regulation.org/