| Project/Area Number |
60224010
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Special Project Research
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Institution | National Institute of Genetics |
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Principal Investigator |
石浜 明 国立遺伝学研究所, その他, 教授 (80019869)
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| Project Period (FY) |
1985
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1985)
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| Budget Amount *help |
¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Fiscal Year 1985: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
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| Keywords | 転写調節 / RNAポリメラーゼ / プロモーター / 酵素機能制御 / 大腸菌 |
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| Research Abstract |
転写装置RNAポリメラーゼによる転写シグナル識別機構を解明するために、【◯!1】RNAポリメラーゼが識別するDNA構造と、【◯!2】転写シグナル識別に必要なRNAポリメラーゼ上の機能部位を解析し、次の結果を得た。
1.大腸菌各種遺伝子からプロモーター(転写開始信号)を含むDNA断片のコレクションを作成し、その混合物を同時に反応させて転写産物RNAを個別に定量する反応測定系を開発した。この混合転写系を用いて、プロモーターの強度順位を沢定し、その結果から、転写装置によって識別されるための、至適の素構造を解析し、推定した。
2.RNAポリメラーゼサブユニット遺伝子に変異をもつ大腸菌から純化した変異RNAポリメラーゼのなかに、プロモーター識別特異性が変化しているものを同定した。変異部位の分析結果から、プロモーター識別に関与する蛋白機能部位を、予備的に推定した。
3.転写因子との相互作用によって、正常Rnaポリメラーゼも、プロモーター識別特異性を変えることを実証した。例えば、ppGppとの相互作用では、緊縮制御をうける遺伝子のプロモーター識別能を失ない、 fMet-【tRNA(^Met_f)】と結合すれば、ある種のプロモーター識別能が昂進した。
4.シグマサブユニットを交換すると、プロモーター選択能が大きく変動することを、熱ショック適応時に作動する【σ^(32)】の純化標品を調製して実証した。
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