| Project/Area Number |
61570138
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Pathological medical chemistry
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
成宮 周 京大, 医学部, 助手 (70144350)
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| Project Period (FY) |
1986
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1986)
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| Budget Amount *help |
¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
Fiscal Year 1986: ¥1,800,000 (Direct Cost: ¥1,800,000)
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| Keywords | プロスタグラジンE合成酵素 / グルタチオントランスフェラーゼ / ヒト脳 / 神経細胞 / アストログリア細胞 / 抗酵素抗体 / 免疫組織化学 |
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| Research Abstract |
ヒト脳可溶性画分よりプロスタグラジンE(PGE)合成酵素を精製し、これに対する抗体を作製した。この抗体を用いてPGE合成酵素のサビユニット機構を解析し、ヒト脳切片でPGE合成酵素の免疫組織化学を行った。以下各々について詳述する。
1.前年度の研究で確立した方法に従い、ヒト脳可溶性画分より2種類のPGE合成酵素(以下ピーク1及びピーク2酵素と称す)を精製し、それぞれを抗原としてウサギを免疫した。3〜4回のブースター注射ののち、各々の酵素に対する抗血精を得た。
2.得られた抗ピーク1及び抗ピーク2のポリクローナル抗体を用い、ピーク1及びピーク2酵素の異同及び各々のサブユニット構造を解析した。この2つの酵素はいづれも2量体であり、ピーク1は24.5Kと25Kの2つのサブユニット、ピーク2は25Kの見かけ上単一のサブユニットの2量体である。また、両酵素はPGE合成酵素活性のほかにグルタチオントランスフェラーゼ活性をもつなどの共通性がある。上記抗体を用いたイムノタイトレーションでは、抗体過剰域で抗ピーク1抗体はピーク1及びピーク2酵素に同程度結合した。しかし、抗ピーク2抗体は、ピーク1にはピーク2の半量しか結合しなかった。この結果は、ピーク1と2の25Kサブユニットが共通の抗原性をもつこと、ピーク1の他の24.5Kサブユニットはこれとは異なることを示唆するものと考えられる。
3.上記の2つの抗体を用いて、手術時に得たヒト大脳皮質切片において免疫組織化学を行った。その結果、抗ピーク1抗体によって神経細胞が強陽性となった。また、アストログリア細胞にも陽性所見がみられた。一方、抗ピーク2抗体によっては、神経細胞にのみ陽性所見がみられた。
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