| Project/Area Number |
61570243
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| Research Category |
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
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| Allocation Type | Single-year Grants |
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| Research Field |
Immunology
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| Research Institution | Kumamoto University |
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Principal Investigator |
原田 登之 熊本大, 医学部, 助手 (40165022)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高津 聖志 熊本大学, 医学部, 教授 (10107055)
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| Project Period (FY) |
1986 – 1987
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| Project Status |
Completed (Fiscal Year 1986)
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| Budget Amount *help |
¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
Fiscal Year 1986: ¥1,300,000 (Direct Cost: ¥1,300,000)
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| Keywords | B151K12 / T cell-replacing factor(TRF) / BCGF【II】 / モノクローナル抗体 / リコンビナントTRF |
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| Research Abstract |
本研究はB細胞増殖分化因子であるTRF(T cell-replacing factor)によるB細胞分化機序を分子レベルで明らかにするため、TRF受容体の解析および細胞内シグナル伝達の解析を目的としている。今年度はTRF受容体解析の為精製TRFを多量に得る目的で、抗TRFモノクローナル抗体の作製を試みた。TRF産生単クローン性T細胞融合細胞B151K12の培養上清より既に報告した方法に準じTRFを高度に精製しラットに免疫した。このラット脾細胞とマウス骨髄腫細胞とをポリエチレングリコールを用い融合させた。融合細胞上清中のTRF活性阻害能及びTRF活性吸収能を検索し、クローニングを行なった結果2つのモノクローナル抗体TB13とNC17を得た。本抗体は共にラットIg【G_1】クラスであり、TRF活性を阻害するだけでなく活性化B細胞に分裂を誘導するBCGF【II】活性をも阻害した。この事実より既に報告したTRF分子にBCGF【II】活性が担われていることが確認された。本抗体はBSF-1,IL-1,IL-2,IL-3活性に対し何ら阻害効果を示さず、調べた範囲内ではTRF/BCGF【II】活性のみを特異的に阻害した。精製TRFを【^(125)I】で放射標識し本抗体による免疫沈降を行ないSDS-PAGEで解析した結果、本抗体は還元剤非存在下で分子量46Kdの物質と特異的に結合すること、また還元剤存在下で46Kd分子は23〜26Kdに移動することが認められた。一方、還元剤非存在下のSDS-PAGEでTRF活性は分子量約46Kdに泳動された。これらの結果より、本抗体は分子量約46KdのTRF分子と特異的に結合すること、またTRF分子は分子量23〜26Kdのサブユニットから成り2量体であることが示された。我々は本庶ら、Severinsonらとの共同研究でクローン化T細胞2.19よりTRF活性をコードする遺伝子(pSP6K-mTRF)のクローニングに成功したが、本抗体はこの遺伝子由来のリコンビナントTRF(γTRF)の活性も阻害し、吸着した。現在、【^(35)S】-メチオニンで放射標識したγTRFを本抗体で精製し、TRF受容体を解析中である。
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