ブタ卵に存在する精子リセプター蛋白をコードするRNAの同定

Research Project

Project/Area Number	61570790
Research Category	Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
Allocation Type	Single-year Grants
Research Field	Obstetrics and gynecology
Research Institution	Kyoto University
Principal Investigator	泰井俊造京都大学, 医学部, 講師 (60144367)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	高井一郎京都大学, 医学部, 助手 (80183432)
Project Period (FY)	1986 – 1987
Project Status	Completed (Fiscal Year 1987)
Budget Amount *help	¥2,100,000 (Direct Cost: ¥2,100,000) Fiscal Year 1987: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000) Fiscal Year 1986: ¥1,400,000 (Direct Cost: ¥1,400,000)
Keywords	豚卵 / 透明帯 / 精子リセプター / mRNA
Research Abstract	昭和62年度の研究計画としては前年度に達成された(1)豚卵に対する各種抗体作製, (2)豚卵からのintactなRNAの抽出法の開発に基づき, より大量のRNAを抽出し, それを鋳型として無細胞蛋白合成系で蛋白合成を行ない, 合成蛋白と(1)の抗体との間で免疫沈降物を作り, 豚卵の精子リセプター蛋白のRNAの同定を行なうことにあった. 今年度preliminaryに免疫沈降物をSDS-ゲル電気泳動法により分析したところ, 特異的なバンドが得られなかった. そこで更にRNA抽出をscale-upし, より高い放射性活性を有する合成蛋白を用いて実験を重ねるべく準備を進めていたところ, J.Deaniによるマウス透明帯精子リセプター蛋白(ZP-3)のクローニングの論文が発表された(PNAS, 83, 4343, 1986). そこで実験計画を変更し, Deanらの発表したcDNA sequenceの一部(42mer)を合成し, マウスのgene bankからこの合成42merとhybridするgene fragmentをクローニングし, これを用いて豚ZP-3のクローニングを行うべく実験を進めている. 現在42merとhybridするgene fragmentのスクリーニング中である.