子宮頚部癌発生におけるヒトパピローウイルスの意義の確立.

Research Project

Project/Area Number	62015097
Research Category	Grant-in-Aid for Cancer Research
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
Principal Investigator	中島孝国立がんセンター研究所, 病理, 室長 (20124422)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	角川曜子国立がんセンター研究所, 分子腫瘍, 研究員 (50172044)
Project Period (FY)	1986 – 1987
Project Status	Completed (Fiscal Year 1987)
Budget Amount *help	¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000) Fiscal Year 1987: ¥2,300,000 (Direct Cost: ¥2,300,000)
Keywords	子宮頚部癌 / ヒトパピローマウイルス / ハイブリダイゼーション / DNA / mRMA
Research Abstract	子宮頚癌新鮮手術材料よりDNAを抽出し, サザンブロット法をもちいて,HPV16ならびに18型の存在を検討した. 17症例のうち, 10例(59%)にHPV DNAが証明され,その内訳はHPV16型が7例,HPV18型が3例であった. 新鮮手術材料の入手不可能な症例では,パラフィンブロックとして保存された組織よりDNAを抽出し,ドットハイブリダイゼーション法を行なった. 子宮頚部浸潤癌69例のうち,29例(42.0%)にHPV16型が認められたが,HPV18型は認められなかった. これらを組織学的にみると,扁平上皮癌;24/55,腺扁平上皮癌;2/6,腺癌;3/7,未分化癌;0/1であった. ドットハイブリダイゼーション法でHPV16型が陽性となった10例をIn situ hybridization法で検討したところ,HPV16型DNAは7例に検出できた. 一方,HPV 16 specific mRNAは3例に検出できた. HeLa細胞中では,HPV18型は主として,1.6kb,3.4kbの2種類のmRNAとして転写されている. これらのmRNAは共に細胞DNA中に組み込まれたHPV18型が,細胞側の転写シグナルを使って転写されたもので,ウイルス由来配列と細胞由来配列が融合したものであった. ウイルス由来配列中には,蛋白質に翻訳され得るOpen Reading Frame(E6,E6,E7)が認められた. 1.6kb,3.4kbのmRNAに相当するcDNAとE7領域のみを含むものをそれぞれNIH3T3細胞に導入した場合,NIH3T3細胞は軟寒天培地中で増殖するようになった. 一方,E6,E6をそれぞれ単独でNIH3T3細胞に導入しても,軟寒天培地中での増殖能は得られなかった. HPV16型を含む子宮頚部癌細胞DNAでトランスホームしたNIH3T3細胞では,HPV16型由来のmRNAが数種類の長さで観察されたが,これらをcDNAライブラリーから単離し,そのうち4つのcDNAクローンについて,構造解析を行なったところ,いずれもウイルス由来の配列中にE7 ORFを持っていた.