Research Abstract |
シリカゲル, 多孔性グラス, 親水性基修飾シリカゲル, ジヒドロキシメタクリレートゲル, ポリエーテルゲルをそれぞれ充てんしたカラムを用い, 濃度, pHの異なるリン酸緩衡液およびこれに塩化ナトリウムを種々の割合で混合した溶液を移動相として, タンパク質, およびポリスチレンスルホン酸ナトリウムのサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)を実施した. 非イオン性水溶性高分子であるプルランのSECでは, 移動相のイオン強度, pHに関係なく, 純粋なサイズ排除効果のみで分離されることを見出したが, イオン性高分子では, イオン強度の低いところではイオン排除効果により, ほとんどゲル細孔に浸透することなく, カラムから溶出し, イオン強度の増加とともに溶出が遅れ, プルランの較正曲線(分子量の対数と保持容量の関係を図示したもの)上にのり, さらにイオン強度を増加することにより, この曲線を越していくことが認められた. すなわち, イオン排除効果, サイズ排除効果, 吸着効果のそれぞれの大きさが, イオン強度によって影響されることを示している. タンパク質の場合には移動相のpHの影響も認められ, 塩基性, 酸性, 中性のタンパク質によって適切なpHの選択が必要であることを見出した. サイズ排除効果を主効果とし, 溶質分離と保持容量の関係を図示してプルランのそれと比較することにより, 吸着やイオン排除を2次効果としてその量的把握を行う方法を確立した. またDebye-Hvckelの電解質理論を適用し, イオン強度の増加とともに, 充てん剤細孔容量の増加と溶質分子の流体力学的体積の減少を示す式を考察し, 実測値との比較を行った. この理論式と実測値から得られた関係式から, 理論値に近いもの程, 2次効果が小さいことが分り, この方法により, 2次効果の量的把握とサイズ排除効果からのずれの予測を可能とした. 多孔質ガラスを用いたSECが最も2次効果が小さいことが認められた.
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