家蚕幼虫消化液プロテア-ゼによるB.thuringiensis結晶性毒素の溶解

• Project/Area Number: 62560054
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: 蚕糸学
• Research Institution: Seinan Jo Gakuin University Junior College
• Principal Investigator: 関 武純 西南女学院短期大学, 家政科, 教授 (80085670)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 安部 一紀 西南女学院短期大学, 食物栄養科, 教授 (30085659)
• Project Period (FY): 1987 – 1989
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1989)
• Budget Amount: ¥1,100,000 (Direct Cost: ¥1,100,000); Fiscal Year 1989: ¥200,000 (Direct Cost: ¥200,000); Fiscal Year 1988: ¥200,000 (Direct Cost: ¥200,000); Fiscal Year 1987: ¥700,000 (Direct Cost: ¥700,000)
• Keywords: Bacillus thuringiensis / 結晶性毒素 / 家蚕幼虫消化液プロテア-ゼ / プロテア-ゼによる結晶性毒素の溶解 / Bocillus thuringiensis結晶性毒素 / 家蚕幼虫消化液プロテアーゼ / プロテアーゼによる結晶性毒素の溶解 / Bacillus thuringiensis結晶性毒素

Research Abstract

筆者らは、従来、家蚕の卒倒病原菌であるB.thuringiensisの産生する結晶性毒素を家蚕幼虫消化液由来のSWproteaseAを用いて溶解し毒素タンパク質の分離を行ってきた。しかしながら家蚕幼虫消化液には数種類のプロテア-ゼが存在することや、得られた毒素タンパク質が極めて不安定であることなどから、プロテア-ゼを更に精製する必要があることが考えられた。そこで種々検討を行った結果、先ず分子量12,700のトリプシン様活性を持つSWproteaseKtを分離した。これとは別にキモトリプシン様活性を有する分子量19,300のSWproteaseKcを分離した。今回、従来用いていたSWproteaseAの分子量は約29,000であることがわかり、SWproteaseAはKtとKcとの複合体の可能性が推察された。そこでSWproteaseKtの基質特異性を検討した。インシュリンを基質とし分解産物を分離した。得られた6画分のアミノ酸組成とインシュリンのアミノ酸配列とを照合し加水分解部位を検索した。その結果、Leu(6)ーCys(7),Ser(9)ーHis(10),Glu(13)ーAla(14),Leu(15)ーTyr(16),Tyr(26)ーThr(27)の5カ所においてペプチドが切断されていることが判明した。インシュリンB鎖の4つのLeuのうち2つが優先的に切断されていることが認められた。更に本酵素のサブサイトについて検討したところ、5つの切断部位の中でP1にLeuが2つ、P2にやはりLeuが3つ見られた。このようにサブサイトに疎水性アミノ酸のLeuが比較的多く認められることは興味あることと思われた。以上のことより、SWproteaseKtはエンド型プロテア-ゼではあるもののアミノ酸に対しては特異性の高い加水分解を行うのではないことが認められた。また加水分解の際、近傍のアミノ酸の種類によって加水分解の部位を決定する傾向があるものと推察された。今後、SWproteaseKcの特異性を検討し、結晶性毒素の溶解について比較検討する所存である。

Research Products

• [Publications] 城戸 浩三: 九州蚕糸. 18. 57 (1987)