グルコースー6-リン酸脱水素酵素異常症の遺伝子レベルでの病因解析

• Project/Area Number: 62571019
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Human genetics
• Research Institution: Tokyo Women's Medical University
• Principal Investigator: 藤井 寿一 東京女子医科大学, 輸血部, 助教授 (70107762)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 三輪 史朗 , ス沖中記念成人病研究所, 所長 (40034954)
• Project Period (FY): 1987
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1987)
• Budget Amount: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000); Fiscal Year 1987: ¥2,000,000 (Direct Cost: ¥2,000,000)
• Keywords: 遺伝性溶血性貧血 / 赤血球酵素異常症 / グリコースー6-リン酸脱水素酵素異常症

Research Abstract

グルコースー6-リン酸脱水素酵素(G6PD)異常症は世界で1億人以上が本症の異常遺伝子を持つと考えられ, 最も頻度の高い代謝異常症である. われわれはわが国において90家系のG6PD異常症を発見してきた. 病因は患者酵素の酵素学的, 生化学的性状より変異酵素の産生によることが最も考えられるが, その詳細は不明である. 正常酵素に関しては昨年度, 米国吉田昭博士らにより相補的DNA(cDNA)のクローニングおよび塩基配列の決定がなされた. われわれはこのcDNAの供与を受けたので, これをプローブとしてG6PD異常症の遺伝子レベルでの病因解明を試みた. 方法はG6PD異常症患者のリンパ球を株化し, そのメッセンジャーRNA(mRNA)をcDNAクローニングの材料に用いてmRNAの全構造を解析する方法をとった. この方法により, われわれは佐賀医大向井博士らと共同でアルドラーゼ(ALD)異常による遺伝性溶血性貧血の遺伝子レベルでの異常を解明した. すなわち, AUGから386番目に一塩基の置換(A→G)がみられた. その結果, 128番目のアスパラキン酸(GAU)がグリシン(GGU)へのアミノ酸置換が起っていることが判明した. さらに, 酵素活性や熱安定性にこの変異が直接かかわっていることを, 大腸菌発現系のベクターを用いて明らかにした. G6PD異常症に関しては, わが国における頻度が約0.1%と考えられるG6PD Ubeと, 特異な基質親和性を示すG6PD Kobeのリンパ芽球を大量培養し, ポリARNAを調製し, λgt10をベクターとしてcDNAライブラリーを作製した. このライブラリーのスクリーニングを行っているが, 現在迄に陽性クローンは得られていない. G6PDはALDc比較するとmRNA含量が少ない事が原因と考えられるが, 現在引き続いてスクリーニングを繰り返している.

Research Products

• [Publications] Kumakawa T,Suzuki S,Fujii H.Miwa S: Acta Haematologica Japonica. 50. 25-28 (1987)
• [Publications] Tani K,Fujii H, Tsutsumi H,Sukegawa J, Toyoshima K,Yoshida MC,Noguchi T,Tanaka T,Miwa S: Biochemical and Biophysical Research Communications. 143. 431-438 (1987)
• [Publications] Kishi h,Mukai T,Hirono A,Jujii H,Miwa S: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84. 8623-8627 (1987)
• [Publications] Hirono A,Fujii H,Natori H,Kurokawa I,Miwa S: British Journal of Haematology. 65. 35-41 (1987)
• [Publications] Kondo T,Ohtsuka Y,Shimada M,Kawakami Y,Hiyoshi Y,Tsuji Y,Fujii H,Miwa S: American Journal of Hematology. 26. 37-45 (1987)
• [Publications] Tani K,Fujii H,Nagata S,Miwa S: Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America.
• [Publications] Fujii H, Kanno H, Tani K, Miwa S: "New Approach to Genetic Diseases" Academic Press Edited by Takehiko Sasazuki, 253 (1987)