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生物燃料直接醗酵菌の育種

Research Project

Project/Area Number 62603020
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas

Allocation TypeSingle-year Grants
Research InstitutionOsaka University

Principal Investigator

岡田 弘輔  大阪大学, 工学部, 教授 (20028947)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 吉田 敏臣  大阪大学, 工学部, 助教授 (00029290)
宮川 都吉  広島大学, 工学部, 助教授 (10116676)
外村 健三  大阪府立大学, 農学部, 教授 (90124867)
鵜高 重三  名古屋大学, 農学部, 教授 (70023463)
別府 輝彦  東京大学, 農学部, 教授 (80011873)
Project Period (FY) 1987
Project Status Completed (Fiscal Year 1987)
Budget Amount *help
¥22,800,000 (Direct Cost: ¥22,800,000)
Fiscal Year 1987: ¥22,800,000 (Direct Cost: ¥22,800,000)
Keywords生でん粉分解酵素 / セルラーゼ / キシラナーゼ / β-キシロシダーゼ / 分泌シグナル / Zymomonas宿主ベクター / Zymomonasプロモーター / 耐熱性酵母 / 酵母育種
Research Abstract

1.醗酵菌に導入すべき遺伝子のクローン化と酵素の改良. 生でん粉分解能を有する細菌を土壌等より広く分離し, 約200株を得た. そのうち5株は高い活性を有していた. さらにその1株について酵素の性質を詳細に検討した(分担者:鵜高). Baeillus Subtilis のセルラーゼ遺伝子をShot qun2法によりB.subtilisにクローン化し, 2.2-kbまで切り縮めた断片について塩基配列を決定した. 一方精製したセルラーゼのN末端領域のアミノ酸配列から本酵素は36アミノ酸残基からなるシグナルを含む499のアミノ酸からなることがわかり, その配列を推定した(分担者:別府). B.pumilusのキシラナーゼと, βキシロシダーゼの遺伝子をクローン化し, 両者遺伝子の塩基配列を決定した. キシラナーゼには27アミノ酸残基からなる分泌シグナルを含む228アミノ酸からなり, 成熟キシラナーゼは201アミノ酸からなっている. キシラナーゼ遺伝子を酵母の2因子の分泌シグナルに継いて酵母, Saccharomyces cerevisiaeに導入すると, キシラナーゼの生産は認められたが, 量的には不充分であった(分担者:岡田).
2.醗酵菌の宿主ベクター系の確立. Zymomonas属細菌の宿主ベクター系を開発するためにZymomonasでの形質転換法を開発した. またZymomonasで高発現させるために必要なプロモーターを分離し, その塩基配列を決定した(分担者:外村). 高温でエタノールを生産するS.cerevisiaeT,J3株を得, 35°Cで11%以上のエタノール蓄積に成功し, さらに細胞融合法により35°Cで12.6%エタノールを蓄積する株の分離に成功した(分担者:吉田)
3.新能力の醗酵菌への導入. S.diastaticuaとS.fiburigeraよりグルコアミラーゼ, α-アミラーゼおよびセロビアーゼを単離し, セロビアーゼ遺伝子を導入したS.cerevisiaeはセロビオースを直接醗酵する能力を有することが判った(分担者:宮川).

Report

(1 results)
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All Publications (6 results)

  • [Publications] 岡田弘輔: Eur.J.Biochem.164. 317-320 (1987)

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  • [Publications] 別府輝彦: Eur.J.Biochem.166. 539-545 (1987)

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  • [Publications] 宮川都吉: J.Bacteriol.169. 4171-4179 (1987)

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  • [Publications] 宮川都吉: FEBS Letter. 219. 339-342 (1987)

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  • [Publications] 外村健三: 化学と生物. 25. 177-185 (1987)

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  • [Publications] 外村健三: 投稿準備中.

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Published: 1987-04-01   Modified: 2018-02-02  

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