ヒトリンホトキシンに対する細胞膜レセプターの構造

• Project/Area Number: 62614511
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 大沢 利昭 東京大学, 薬学部, 教授 (40012603)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山本 一夫 東京大学, 薬学部, 助手 (20174782)
• Project Period (FY): 1987
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1987)
• Budget Amount: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000); Fiscal Year 1987: ¥2,800,000 (Direct Cost: ¥2,800,000)
• Keywords: リンホトキシン / リンホトキシンレセプター

Research Abstract

1.LTレセプターの分布:Iodogen法により標識した^<125>I-LTの結合実験により, 種々の細胞におけるLTレセプター数および解離定数(Kd)を調べた. TLに感受性のマウス腺維芽細胞L929はスキャッチャードプロットによる解析から, レセプター数は細胞当り7.2×10^3個, Kd=1.4×10^<-10>Mであった. L929の亜株でLTに対して10〜20倍感受性の高いL-P3細胞でもレセプター数は5.7×10^3個/細胞, Kd=3.8×10^<-10>Mであり, レセプターに大きな差は見られなかった. 他に, HeLaS3, A375, K562, U937などの種々の細胞についてもほぼ同じ量のレセプター数であったが, LTに対する感受性についてはさまざまで, 細胞破壊を起こすもの, 増殖抑制を起こすもの, 非感受性であるものなど多岐にわたっており, LTに対する感受性とLTレセプターとの相関は認められなかった.
2.LTレセプターの誘導:LTの感受性は, γインターフェロン, A23187, PMAなどの種々の薬剤により大きく変化することが知られている. そこで, 種々の薬剤による感受性の増加する条件下でのLTレセプターの変化について^<25>I-LTの結合実験により検討した. γインターフェロンは感受性は約100倍上昇させるのに対し, レセプター数の変化は認められなかった. 他の薬剤に関しても同様にレセプター数の変化は見られず, 種々の薬剤による感受性の増加とレセプターとの相関は見出されなかった.
3.LTレセプターの同定:^<125>I-LTをL929細胞に結合させDSSによりLTレセプターとの架橋を行った. 細胞を1%TX-100により可溶化を行い, O, Farrellの二次元電気泳動で解析を行なったところ, LT-LTレセプター複合体は, 97K, PI6.8および70K, PI6.8の2つの主要なバンドが認められた.