マイオサイトの収縮および自発的運動におけるホスホランバンの役割とα_1受容体の役割

• Project/Area Number: 63570061
• Research Category: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Research Field: Neurophysiology and muscle physiology
• Research Institution: Fukushima Medical University
• Principal Investigator: 鈴木 隆 福島県立医科大学, 医学部薬理学, 助手 (20133184)
• Project Period (FY): 1988
• Project Status: Completed (Fiscal Year 1988)
• Budget Amount: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000); Fiscal Year 1988: ¥1,000,000 (Direct Cost: ¥1,000,000)
• Keywords: α_1受容体 / プラゾシン / 受容体結合活性

Research Abstract

α_1受容体精製を行う前に膜分画を用いて受容体測定法を考察した。方法として次の順序にて行った。
1)細胞膜分画の調製
ブタ心臓左心室を4倍量のアンチペイン(5μg/ml)、ロイペプチン(5μg/ml)、1mMEDTAおよび0.25Mショ糖を含む20mMHEPES,pH7.4溶液でマイルドにホモジナイズし、800xg、15分間遠心した。その上清をさらに9000xgで15分間遠心し、その沈査を0.25Mショ糖で懸濁後70%ショ糖溶液で最終濃度44%にした。遠心管に懸濁液を入れ、42.5%および0.25Mショ糖溶液を重層し45K回転で40分間遠心した。42.5%ショ糖上に生じた膜画分を細胞膜画分とした。
2)細胞膜を用いた受容体測定法の考察
α_1受容体のアンタゴニスト(放射性^BH)プラゾシンを用いて、結合活性をニトロセルロース膜を用いたロ過法により測定した。総結合量合活性は1〜10μM放射性プラゾシン結合量とし、非特異的結合量は20μM非放射性プラゾシン存在下1〜10μM放射性プラゾシンの結合量とした。真の結合量は総結合から非特異的結合量を引いたものとした。真の結合量は、タンパク量およびプラゾシン量に応じて直線性を示した。
3)可溶化膜成分中の受容体測定法の考察
膜を0.5%CHAPSで可溶化後、45K回転で40分間遠心し、上清を受容体結合測定に用いた。5%ポリエチレンイミド、pH10の溶液で処理したグラスファイバーフィルターを用いて、ロ過法にて放射性プラゾシン結合量を測定した。真の結合量は放射性プラゾシン量の上昇と共に、およびタンパク量と共に直線的に上昇した。
以上の結果は、α_1受容体の分離精製の基礎を築くものである。