c-myc遺伝子の転写制御機構

Research Project

Project/Area Number	63620517
Research Category	Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
Allocation Type	Single-year Grants
Research Institution	National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
Principal Investigator	林健志国立がんセンター研究所, 腫瘍遺伝子研究部, 室長 (00019671)
Project Period (FY)	1988
Project Status	Completed(Fiscal Year 1988)
Budget Amount *help	¥1,600,000 (Direct Cost : ¥1,600,000) Fiscal Year 1988 : ¥1,600,000 (Direct Cost : ¥1,600,000)
Keywords	c-myc / 転写制御 / 再生肝 / 無細胞転写系 / プロモーター / Gフリーカセット
Research Abstract	1.実験条件の検討:ラット正常および再生肝から核抽出液を調整した。また、テンプレートとして、ラットc-mycの主要なプロモーターであるP2から上流2kbを含み、かつ転写開始点下流にはGを持たない配列(Gフリーカセット)を合成して挿入したプラスミドを用いた。GTPを含まない反応液中で転写を行わせると、開始点から最初のGまでの長さのRNAが忠実な転写産物として観察される。c-mycプロモーターからの転写効率を種々の条件で検討した結果、テンプレート濃度が低い場合には、無関係なDNAを加えることにより、転写活性が上昇することが観察された。また、一定量以上のDNAは転写を阻害する。そこで以下の実験では至適DNA濃度で反応を行なった。アデノウィルスMLプロモーター、アルブミンプロモーターをそれぞれGFCにつないだプラスミドを作成し、これらと、c-mycプロモーターとの相対的転写活性を検討した。c-mycプロモーターはAdNLの約10分の1、アルブミンプロモーターより数倍強いことが判明した。肝臓中で、c-mycの転写がアルブミン遺伝子の転写より多いとは考えられないから、この反応系ではc-mycの転写抑制機構が失われているものと考えられる。 2.c-myc上流の転写への影響:c-mycプロモーター上流を欠失させた種々のテンプレートの転写活性を検討した結果、P2のTATA配列上流、約60塩基のあたりに転写促進領域が存在することが示唆された。 3.考察と展望:本実験で用いた無細胞転写系では、正常肝、再生肝でのc-myc転写活性に有意の差はみとめられなかったので、核抽出液の調整法を再検討する必要がある。また、上記転写促進領域に結合する因子を同定、精製することを試みる。