Dynamics and protein folding mechanism of prefoldin and group II chaperonin system
Publicly Offered Research
Project Area | Dynamical ordering of biomolecular systems for creation of integrated functions |
Project/Area Number |
16H00753
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Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
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Allocation Type | Single-year Grants |
Review Section |
Science and Engineering
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Research Institution | Tokyo University of Agriculture and Technology |
Principal Investigator |
養王田 正文 東京農工大学, 工学(系)研究科(研究院), 教授 (50250105)
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Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2018-03-31
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Project Status |
Completed (Fiscal Year 2017)
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Budget Amount *help |
¥6,370,000 (Direct Cost: ¥4,900,000、Indirect Cost: ¥1,470,000)
Fiscal Year 2017: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
Fiscal Year 2016: ¥3,120,000 (Direct Cost: ¥2,400,000、Indirect Cost: ¥720,000)
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Keywords | シャペロン / シャペロニン / フォールディング / 結晶化 / 相互作用 / プレフォルディン / ダイナミクス |
Outline of Annual Research Achievements |
好熱性真菌Chaetomium thermophilum由来プレフォルディン(CtPFD)の機能・構造解析、及びC. thermophilum由来グループ2型シャペロニン(CtCCT)との協調作用を解析した。CtPFDが豚脳由来チューブリンと結合することをPull Down Assayで解析した。CtPFDの結晶化スクリーニングを行い、結晶を得ることに成功した。得られた結晶にX線を照射したが、分解能が低く詳細な構造の解明には至らなかった。古細菌由来PFDの結晶構造において末端領域に存在するDisorder領域の構造が明らかとなっていないことから、Disorder領域が分解能低下の原因である可能性が予想された。そこで、長い末端を有するアルファ型サブユニットである PFD3の両末端を28残基、PFD5のN末端20残基及びC末端21残基削った変異体を構築した。この変異体の機能及び結晶構造解析を継続して進めている。CtPFDとCtCCTの相互作用をBiacoreを用いた表面プラスモン共鳴により解析した。獲得したセンサーグラムに対しカーブフィッティング行い、結合・解離速度定数及び解離定数を決定した。解離定数は先行研究より報告されている超好熱性古細菌Pyrococcus horikoshii OT3由来PFDとCPNのものとおよそ一致していた。また、高速AFM及び電子顕微鏡によりCtCCTとCtPFDの相互作用を解析し、CtCCTにCtPFDが結合している様子が観察された。また、アクチンがCtPFDからCtCCTに受け渡されることを実験的に証明した。再構成型大腸菌無細胞タンパク質合成系(Pure System)を用い、CtPFDとCtCCTの種々の真核生物由来細胞質タンパク質のフォールディングへの効果を解析した。
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Research Progress Status |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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Strategy for Future Research Activity |
29年度が最終年度であるため、記入しない。
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Report
(2 results)
Research Products
(30 results)
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[Journal Article] Olfactory receptor accessory proteins play crucial roles in receptor function and gene choice2017
Author(s)
R. Sharma, Y. Ishimaru, I. Davison, K. Ikegami, M. S. Chien, H. You, Q. Chi, M. Kubota, M. Yohda, M. Ehlers, H. Matsunami
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Journal Title
DOI
Related Report
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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