ロドプシンによる葉緑体プロトン勾配制御システムの確立と植物応答解析への展開

• Project Area: New Photosynthesis : Reoptimization of the solar energy conversion system
• Project/Area Number: 17H05726
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Biological Sciences
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 須藤 雄気 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (10452202)
• Project Period (FY): 2017-04-01 – 2019-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2018)
• Budget Amount: ¥6,500,000 (Direct Cost: ¥5,000,000、Indirect Cost: ¥1,500,000); Fiscal Year 2018: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000); Fiscal Year 2017: ¥3,250,000 (Direct Cost: ¥2,500,000、Indirect Cost: ¥750,000)
• Keywords: ロドプシン / 光 / プロトンポンプ / 生物物理 / NPQ / 膜タンパク質 / オプトジェネティクス

Outline of Annual Research Achievements

植物による光合成は、水と二酸化炭素から、炭素固定・酸素発生・ATP産生を行う反応で、生命活動の源でもある。植物には、光強度にあわせて余剰なエネルギーを熱として放出する機構（Non photochemical quenching：NPQ）が備わっており、効率的な光合成を実現している。これらは、光合成に伴うルーメン側の酸性化（プロトン濃度上昇）が引き金になることがわかっているが、その制御機構はわかっていない。本研究では、光合成色素クロロフィルがほとんど吸収しない緑色光で働くロドプシンを植物の葉緑体に異種発現させ、人為的に膜を介したプロトン移動を誘起する。これにより、擬似的に強・弱光条件を再現し、その際に起こる植物応答を解析することで、NPQ制御メカニズムを解明することを目的としている。
本年（H30年度）は、（１）内向きプロトンポンプロドプシンと外向きプロトンポンプロドプシンを植物モデルとしてのクラミドモナスおよびシロイヌナズナへの遺伝子導入を行い、その組み換え体においてそれぞれのロドプシン発現を確認した。植物細胞における異種ロドプシンの発現は世界初となる成果である。（２）クラミドモナスについては、NPQ測定を行い内向きプロトンポンプを発現した際に狙い通り光照射によりNPQが有意に増大することを確認した。外向きプロトンポンプでは若干の低下がみられた。このようにロドプシンを用いてNPQを制御することに世界で初めて成功した。シロイヌナズナについては、内向きプロトンポンプの発現は確認できたが、外向きプロトンポンプの発現は確認できなかった。
以上のように、植物にロドプシンを発現させその生理応答（NPQ)を調節するという当初の目的は達成された。

Research Progress Status

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Int'l Joint Research] Weizmann Institute of Science(イスラエル)
• [Journal Article] Production of a Light-Gated Proton Channel by Replacing the Retinal Chromophore with Its Synthetic Vinylene Derivative. (2018)
  • Author(s): R. Takayama, A. Kaneko , T. Okitsu, S. P. Tsunoda, K. Shimono , M. Mizuno, K. Kojima, T. Tsukamoto, H. Kandori, Y. Mizutani, A. Wada, Y. Sudo
  • Journal Title: J Phys Chem Lett Volume: 9 Issue: 11 Pages: 2857-2862
  • DOI: 10.1021/acs.jpclett.8b00879
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Mutational analysis of the conserved carboxylates of anion channelrhodopsin-2 (ACR2) expressed in <i>Escherichia coli</i> and their roles in anion transport (2018)
  • Author(s): Kojima Keiichi、C. Watanabe Hiroshi、Doi Satoko、Miyoshi Natsuki、Kato Misaki、Ishikita Hiroshi、Sudo Yuki
  • Journal Title: Biophysics and Physicobiology Volume: 15 Issue: 0 Pages: 179-188
  • DOI: 10.2142/biophysico.15.0_179
  • NAID: 130007472538
  • ISSN: 2189-4779
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Presence of a Haloarchaeal Halorhodopsin-Like Cl⁻ Pump in Marine Bacteria (2018)
  • Author(s): Nakajima Yu、Tsukamoto Takashi、Kumagai Yohei、Ogura Yoshitoshi、Hayashi Tetsuya、Song Jaeho、Kikukawa Takashi、Demura Makoto、Kogure Kazuhiro、Sudo Yuki、Yoshizawa Susumu
  • Journal Title: Microbes and Environments Volume: 33 Issue: 1 Pages: 89-97
  • DOI: 10.1264/jsme2.ME17197
  • NAID: 130006581777
  • ISSN: 1342-6311, 1347-4405
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Retinal configuration of ppR intermediates revealed by photo-irradiation solid-state NMR and DFT (2018)
  • Author(s): Yoshiteru Makino, Izuru Kawamura, Takashi Okitsu, Akimori Wada, Naoki Kamo, Yuki Sudo, Kazuyoshi Ueda, Akira Naito
  • Journal Title: Biophys. J Volume: 115 Issue: 1 Pages: 72-83
  • DOI: 10.1016/j.bpj.2018.05.030
  • NAID: 120006698118
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Correction to “High Thermal Stability of Oligomeric Assemblies of Thermophilic Rhodopsin in a Lipid Environment” (2018)
  • Author(s): Shionoya Tomomi、Mizuno Misao、Tsukamoto Takashi、Ikeda Kento、Seki Hayato、Kojima Keiichi、Shibata Mikihiro、Kawamura Izuru、Sudo Yuki、Mizutani Yasuhisa
  • Journal Title: The Journal of Physical Chemistry B Volume: 122 Issue: 42 Pages: 9826-9826
  • DOI: 10.1021/acs.jpcb.8b09660
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Retinal?Salinixanthin Interactions in a Thermophilic Rhodopsin (2018)
  • Author(s): Misra Ramprasad、Eliash Tamar、Sudo Yuki、Sheves Mordechai
  • Journal Title: The Journal of Physical Chemistry B Volume: 123 Issue: 1 Pages: 10-20
  • DOI: 10.1021/acs.jpcb.8b06795
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Spectroscopic characteristics of Rubricoccus marinus xenorhodopsin (RmXeR) and a putative model for its inward H+ transport mechanism (2018)
  • Author(s): Inoue Saki、Yoshizawa Susumu、Nakajima Yu、Kojima Keiichi、Tsukamoto Takashi、Kikukawa Takashi、Sudo Yuki
  • Journal Title: Phys. Chem. Chem. Phys. Volume: 20 Issue: 5 Pages: 3172-3183
  • DOI: 10.1039/c7cp05033j
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparative evaluation of the stability of seven-transmembrane microbial rhodopsins to various physicochemical stimuli (2017)
  • Author(s): Honda Naoya、Tsukamoto Takashi、Sudo Yuki
  • Journal Title: Chem. Phys. Lett. Volume: 682 Pages: 6-14
  • DOI: 10.1016/j.cplett.2017.05.055
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Few-cycle pulse generation from noncollinear optical parametric amplifier with static dispersion compensation (2017)
  • Author(s): Shunsuke Adachi, Yuya Watanabe, Yuki Sudo, Toshinori Suzuki
  • Journal Title: Chemical Physics Letters Volume: 印刷中 Pages: 7-11
  • DOI: 10.1016/j.cplett.2017.04.001
  • Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Hybrid Model Membrane Combining Micropatterned Lipid Bilayer and Hydrophilic Polymer Brush (2017)
  • Author(s): Nishimura Toshiki、Tamura Fuyuko、Kobayashi Sawako、Tanimoto Yasushi、Hayashi Fumio、Sudo Yuki、Iwasaki Yasuhiko、Morigaki Kenichi
  • Journal Title: Langmuir Volume: 33 Issue: 23 Pages: 5752-5759
  • DOI: 10.1021/acs.langmuir.7b00463
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Conversion of microbial rhodopsins: insights into functionally essential elements and rational protein engineering (2017)
  • Author(s): Kaneko Akimasa、Inoue Keiichi、Kojima Keiichi、Kandori Hideki、Sudo Yuki
  • Journal Title: Biophysical Reviews Volume: 9 Issue: 6 Pages: 861-876
  • DOI: 10.1007/s12551-017-0335-x
  • Peer Reviewed
• [Presentation] Light can be used a Drug: What should we learn from the photoactive retinal proteins (2018)
  • Author(s): Sudo Y.
  • Organizer: Lecture for graduated students at the department of applied chemistry
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] 光依存性イオンポンプとイオンチャネルの機能解析と機能変換 (2018)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第3回イオンチャネル研究会
  • Invited
• [Presentation] 生体由来光受容分子ロドプシンの機能多様性と光操作ツール開発 (2018)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第67回高分子討論会
  • Invited
• [Presentation] Diversity of microbial rhodopsins and their applicability for optogenetics (2018)
  • Author(s): Sudo Y.
  • Organizer: The 18th International Conference on Retinal Proteins
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] Optical control of biological activities by microbial rhodopsins (2018)
  • Author(s): Sudo Y.
  • Organizer: The Voltage Imaging Mini Symposium
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] Microbial Rhodopsins with Rich Diversity & Great Potential (2018)
  • Author(s): Yuki Sudo
  • Organizer: The 2nd Symposium of Chiral Molecular Science and Technology in Chiba University, Advanced Materials Science, Biology & Nanophotonics in Chiba
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] Photoactive Retinal Proteins with wide Distribution, rich Diversity & great Potential (2018)
  • Author(s): Yuki Sudo
  • Organizer: The 4th International Workshop on Chromogenic Materials and Devices
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] 光刺激と生物応答から学ぶ生体 光操作ツールの開発 (2018)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 分子研研究会
  • Invited
• [Presentation] 光受容タンパク質ロドプシンの 機能多様性とそれに基づく生命機能の人工光操作 (2018)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 日本化学会・第98春季年会
  • Invited
• [Presentation] フォトケミカルバイオロジーツールとしてのレチナールタンパク質 (2017)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第二回先端ケミカルバイオロジー研究会
  • Invited
• [Presentation] そうだ、光を、くすりにしよう (2017)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 生化学若手の会 中四国支部 主催セミナー “オモロイ研究の極め方 2017夏”
  • Invited
• [Presentation] Diversity and Applicability of Microbial Rhodopsins (2017)
  • Author(s): Yuki Sudo
  • Organizer: The 8th Asia and Oceania Conference for Photobiology (AOCP)
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] Diversity of Microbial Rhodopsins and their Applicability for Optogenetics (2017)
  • Author(s): Yuki Sudo
  • Organizer: The 39th Annual Meeting of the Japanese Society for Comparative Physiology and Biochemistry (JSCPB2017)
  • Invited
• [Book] 光エネルギー変換の新常識！ -光駆動2価多原子アニオン輸送体の発見とその分光特性- (2017)
  • Author(s): 仁保亜希子、須藤雄気
  • Publisher: academist Journal
• [Remarks] 研究室ホームページ
  • URL: http://www.pharm.okayama-u.ac.jp/lab/bukka/index.html