ロドプシンを起動分子とした「化学・力学・光」エネルギー発動機構の理解と利用

• Project Area: Molecular Engine: Design of Autonomous Functions through Energy Conversion
• Project/Area Number: 19H05396
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
• Allocation Type: Single-year Grants
• Review Section: Complex systems
• Research Institution: Okayama University
• Principal Investigator: 須藤 雄気 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (10452202)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2021-03-31
• Project Status: Completed (Fiscal Year 2020)
• Budget Amount: ¥5,850,000 (Direct Cost: ¥4,500,000、Indirect Cost: ¥1,350,000); Fiscal Year 2020: ¥2,990,000 (Direct Cost: ¥2,300,000、Indirect Cost: ¥690,000); Fiscal Year 2019: ¥2,860,000 (Direct Cost: ¥2,200,000、Indirect Cost: ¥660,000)
• Keywords: ロドプシン / 光 / 生物物理 / オプトジェネティクス / エネルギー変換 / 受容体

Outline of Research at the Start

光受容タンパク質であるロドプシンは発色団レチナールにより光エネルギーを吸収し、その後、レチナールの異性化を引き起こすことで、化学エネルギーを生み出す。生成した化学エネルギーはタンパク質の構造変化として力学エネルギーに変換され、生物学的機能が生まれる。また、ロドプシンは光エネルギー変換体としても注目されている。本研究では、このような『光-->化学・力学・光』エネルギー変換機構の精密・詳細な解析を行う。加えて、得られた知見を基盤に、ロドプシンを用いた生体光操作ツールの開発・利用を行う。これにより、ロドプシン型『発動分子』の基礎学理構築を行う。

Outline of Annual Research Achievements

ロドプシンは光エネルギーを吸収し、レチナールの異性化を介して化学エネルギーへと変換する。化学エネルギーは、タンパク質の構造変化として力学エネルギーに変換され、分子機能が発現する。また、ロドプシンは、蛍光を発する特性を有し、光エネルギーにも変換可能である。このように、本領域における『発動分子』の定義（外部エネルギーを別エネルギーへ変えるもの）から、ロドプシンはまさに“発動分子”そのものと言える。このような背景のもと、本研究では、ロドプシンによる『光-->化学・力学・光』エネルギーへの変換機構の理解と光遺伝学的利用を行うことで、ロドプシン型『発動分子』の基礎学理構築を行うことを目的とした。

本年度は、以下に示す多様なロドプシンのマルチ『光-->化学・力学・光』発動機構（エネルギー変換）の理解を進めた。さらに、これらを基盤に、分子機能（速度，収率，構造変化，生理応答，発光）の合理的改変の試みと光遺伝学への展開を行った。
１）『光-->化学』：多様なロドプシンに対し、“時間”分解測定（過渡吸収，ラマン・赤外）及び“空間”分解測定（ラマン・赤外，X線結晶構造，NMR）を行い異性化速度，量子収率，異性化に伴うレチナール及びタンパク質の構造変化を調べた。得られた定量的な数値とその比較から、『光-->化学』エネルギー変換の理解を進めた。
（２）『光-->（化学）-->力学』：レチナールの異性化を引き金するロドプシンの構造変化，他分子との相互作用とその変化を、時空間分解測定により明らかにした。加えて、生化学的・細胞生物学的解析を行い、構造と機能に関わる『化学-->力学』エネルギー変換機構の理解を進めた。
（３）『光-->光』：定常蛍光分光法と各種時間分解分光法を組み合わせ、多様なロドプシンの蛍光特性の定量的比較解析と発光機構の解明を行い、『光-->光』エネルギー変換の理解を進めた。

Research Progress Status

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

Strategy for Future Research Activity

令和2年度が最終年度であるため、記入しない。

Research Products

• [Int'l Joint Research] モンテレーベイ水族館(米国)
• [Int'l Joint Research] ワイズマン研究所(イスラエル)
• [Journal Article] Further thermo‐stabilization of thermophilic rhodopsin from Thermus thermophilus JL ‐18 through engineering in extramembrane regions (2021)
  • Author(s): Akiyama Tomoki、Kunishima Naoki、Nemoto Sayaka、Kazama Kazuki、Hirose Masako、Sudo Yuki、Matsuura Yoshinori、Naitow Hisashi、Murata Takeshi
  • Journal Title: Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics Volume: 89 Issue: 3 Pages: 301-310
  • DOI: 10.1002/prot.26015
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Mechanism of absorption wavelength shifts in anion channelrhodopsin-1 mutants (2021)
  • Author(s): Tsujimura Masaki、Noji Tomoyasu、Saito Keisuke、Kojima Keiichi、Sudo Yuki、Ishikita Hiroshi
  • Journal Title: Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergetics Volume: 1862 Issue: 2 Pages: 148349-148349
  • DOI: 10.1016/j.bbabio.2020.148349
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] マルチタレント光受容タンパク質「ロドプシン」 (2021)
  • Author(s): 須藤雄気、小島慧一
  • Journal Title: 現代化学 Volume: 5 Pages: 50-53
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Lokiarchaeota archaeon schizorhodopsin-2 (LaSzR2) is an inward proton pump displaying a characteristic feature of acid-induced spectral blue-shift (2020)
  • Author(s): Kojima Keiichi、Yoshizawa Susumu、Hasegawa Masumi、Nakama Masaki、Kurihara Marie、Kikukawa Takashi、Sudo Yuki
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 10 Issue: 1 Pages: 20857-20857
  • DOI: 10.1038/s41598-020-77936-9
  • NAID: 120006955824
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Applicability of Styrene-Maleic Acid Copolymer for Two Microbial Rhodopsins, RxR and HsSRI. (2020)
  • Author(s): Tetsuya Ueta, Keiichi Kojima, Tomoya Hino, Mikihiro Shibata, Shingo Nagano, Yuki Sudo*
  • Journal Title: Biophysical journal Volume: 119 Issue: 9 Pages: 1760-1770
  • DOI: 10.1016/j.bpj.2020.09.026
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Comparative Studies of the Fluorescence Properties of Microbial Rhodopsins: Spontaneous Emission Versus Photointermediate Fluorescence (2020)
  • Author(s): Kojima Keiichi、Kurihara Rika、Sakamoto Masayuki、Takanashi Tsukasa、Kuramochi Hikaru、Zhang Xiao Min、Bito Haruhiko、Tahara Tahei、Sudo Yuki
  • Journal Title: The Journal of Physical Chemistry B Volume: 124 Issue: 34 Pages: 7361-7367
  • DOI: 10.1021/acs.jpcb.0c06560
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Green-Sensitive, Long-Lived, Step-Functional Anion Channelrhodopsin-2 Variant as a High-Potential Neural Silencing Tool (2020)
  • Author(s): Kojima Keiichi、Miyoshi Natsuki、Shibukawa Atsushi、Chowdhury Srikanta、Tsujimura Masaki、Noji Tomoyasu、Ishikita Hiroshi、Yamanaka Akihiro、Sudo Yuki
  • Journal Title: The Journal of Physical Chemistry Letters Volume: 11 Issue: 15 Pages: 6214-6218
  • DOI: 10.1021/acs.jpclett.0c01406
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] A unique clade of light-driven proton-pumping rhodopsins evolved in the cyanobacterial lineage (2020)
  • Author(s): Hasegawa Masumi、Hosaka Toshiaki、Kojima Keiichi、Nishimura Yosuke、Nakajima Yu、Kimura-Someya Tomomi、Shirouzu Mikako、Sudo Yuki、Yoshizawa Susumu
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 10 Issue: 1 Pages: 16752-16752
  • DOI: 10.1038/s41598-020-73606-y
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Interaction of Escherichia coli and its culture supernatant with Vibrio vulnificus during biofilm formation (2020)
  • Author(s): Ohn Han‐Min、Mizuno Tamaki、Sudo Yuki、Miyoshi Shin‐Ichi
  • Journal Title: Microbiology and Immunology Volume: 64 Issue: 9 Pages: 593-601
  • DOI: 10.1111/1348-0421.12829
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Bacterium Lacking a Known Gene for Retinal Biosynthesis Constructs Functional Rhodopsins (2020)
  • Author(s): Nakajima Yu、Kojima Keiichi、Kashiyama Yuichiro、Doi Satoko、Nakai Ryosuke、Sudo Yuki、Kogure Kazuhiro、Yoshizawa Susumu
  • Journal Title: Microbes and Environments Volume: 35 Issue: 4 Pages: n/a-n/a
  • DOI: 10.1264/jsme2.me20085
  • NAID: 130007950468
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Diversity and Potential of Microbial Rhodopsins (2020)
  • Author(s): 須藤雄気、小島慧一
  • Journal Title: Seibutsu Butsuri Volume: 60 Issue: 4 Pages: 209-214
  • DOI: 10.2142/biophys.60.209
  • NAID: 130007881674
  • ISSN: 0582-4052, 1347-4219
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Vectorial Proton Transport Mechanism of RxR, a Phylogenetically Distinct and Thermally Stable Microbial Rhodopsin (2020)
  • Author(s): Kojima Keiichi、Ueta Tetsuya、Noji Tomoyasu、Saito Keisuke、Kanehara Kanae、Yoshizawa Susumu、Ishikita Hiroshi、Sudo Yuki
  • Journal Title: Scientific Reports Volume: 10 Issue: 1 Pages: 1-11
  • DOI: 10.1038/s41598-019-57122-2
  • NAID: 120006884916
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] The Unlimited Potential of Microbial Rhodopsins as Optical Tools (2020)
  • Author(s): Kojima K, Shibukawa A, Sudo Y
  • Journal Title: Biochemistry Volume: 59(3) Issue: 3 Pages: 218-229
  • DOI: 10.1021/acs.biochem.9b00768
  • NAID: 120006939595
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] How Does a Microbial Rhodopsin RxR Realize Its Exceptionally High Thermostability with the Proton-Pumping Function Being Retained? (2020)
  • Author(s): Hayashi Tomohiko、Yasuda Satoshi、Suzuki Kano、Akiyama Tomoki、Kanehara Kanae、Kojima Keiichi、Tanabe Mikio、Kato Ryuichi、Senda Toshiya、Sudo Yuki、Murata Takeshi、Kinoshita Masahiro
  • Journal Title: The Journal of Physical Chemistry B Volume: 124 Issue: 6 Pages: 990-1000
  • DOI: 10.1021/acs.jpcb.9b10700
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Methodology for Further Thermostabilization of an Intrinsically Thermostable Membrane Protein Using Amino Acid Mutations with Its Original Function Being Retained (2020)
  • Author(s): Yasuda Satoshi、Akiyama Tomoki、Nemoto Sayaka、Hayashi Tomohiko、Ueta Tetsuya、Kojima Keiichi、Tsukamoto Takashi、Nagatoishi Satoru、Tsumoto Kouhei、Sudo Yuki、Kinoshita Masahiro、Murata Takeshi
  • Journal Title: Journal of Chemical Information and Modeling Volume: 60 Issue: 3 Pages: 1709-1716
  • DOI: 10.1021/acs.jcim.0c00063
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Photochemical Characterization of a New Heliorhodopsin from the Gram-Negative Eubacterium Bellilinea caldifistulae (BcHeR) and Comparison with Heliorhodopsin-48C12 (2019)
  • Author(s): Shibukawa A, Kojima K, Nakajima Y, Nishimura Y, Yoshizawa S, Sudo Y
  • Journal Title: Biochemistry Volume: 58(26) Issue: 26 Pages: 2934-2943
  • DOI: 10.1021/acs.biochem.9b00257
  • NAID: 120006847070
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Quantitation of the neural silencing activity of anion channelrhodopsins in Caenorhabditis elegans and their applicability for long-term illumination (2019)
  • Author(s): Yamanashi T, Maki M, Kojima K, Shibukawa A, Tsukamoto T, Chowdhury S, Yamanaka A, Takagi S, Sudo Y
  • Journal Title: Sci. Rep. Volume: 9(1) Issue: 1 Pages: 7863-7863
  • DOI: 10.1038/s41598-019-44308-x
  • NAID: 120006733902
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] A distinct lineage of giant viruses brings a rhodopsin photosystem to unicellular marine predators (2019)
  • Author(s): Needham David M.、Yoshizawa Susumu、Hosaka Toshiaki et. al.
  • Journal Title: Proceedings of the National Academy of Sciences Volume: 116 Issue: 41 Pages: 20574-20583
  • DOI: 10.1073/pnas.1907517116
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] GABA neurons in the ventral tegmental area regulate non-rapid eye movement sleep in mice (2019)
  • Author(s): Chowdhury Srikanta、Matsubara Takanori、Miyazaki Toh、Ono Daisuke、Fukatsu Noriaki、Abe Manabu、Sakimura Kenji、Sudo Yuki、Yamanaka Akihiro
  • Journal Title: eLife Volume: 8
  • DOI: 10.7554/elife.44928
  • Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Application of High-Sensitivity UV photoemission Spectroscopy to Examine the Electronic Structure of Thermophilic Rhodopsin (2019)
  • Author(s): Sano Daisuke、Ide Ichiro、Akiyama Tomoki、Tanaka Yuya、Sudo Yuki、Murata Takeshi、Ishii Hisao
  • Journal Title: Molecular Crystals and Liquid Crystals Volume: 687 Issue: 1 Pages: 34-39
  • DOI: 10.1080/15421406.2019.1648052
  • Peer Reviewed
• [Presentation] 『光 が くすりになる！？』 (2020)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第８回青陵サイエンストーク
  • Invited
• [Presentation] ロドプシンの生物物理化学研究： 光 が くすりになる！？ (2019)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第141回（2019年）・日本薬学会中国四国支部例会
  • Invited
• [Presentation] 『光 が くすりになる！？』 (2019)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 岡山大学病院・市民フォーラム2019
  • Invited
• [Presentation] A bottom-up approach to Utilizing Microbial Rhodopsins for Optogenetics (2019)
  • Author(s): Yuki Sudo
  • Organizer: 2019 ESP-IUPB World Congress
  • Int'l Joint Research / Invited
• [Presentation] 微生物型 ロドプシンによる ボトムアップ型 光操作ツール開発 (2019)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: ISSPワークショップ 「レチナールタンパク質の光機能発現の物理と化学」
  • Invited
• [Presentation] Promoting Optogenetics by Microbial Rhodopsins (2019)
  • Author(s): 須藤雄気
  • Organizer: 第11回・光操作研究会
  • Invited
• [Remarks] 研究室ホームページ
  • URL: http://www.pharm.okayama-u.ac.jp/lab/bukka/
• [Patent(Industrial Property Rights)] 光により細胞死を制御する方法 (2020)
  • Inventor(s): 須藤雄気、小島慧一、中尾新
  • Industrial Property Rights Holder: 須藤雄気、小島慧一、中尾新
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Industrial Property Number: 2020-196718
  • Filing Date: 2020
• [Patent(Industrial Property Rights)] 膜電位センサー (2020)
  • Inventor(s): 坂本雅行、チョウシャオミン、尾藤晴彦、須藤雄気、小島慧一
  • Industrial Property Rights Holder: 坂本雅行、チョウシャオミン、尾藤晴彦、須藤雄気、小島慧一
  • Industrial Property Rights Type: 特許
  • Industrial Property Number: 2020-070136
  • Filing Date: 2020