Publicly Offered Research
Grant-in-Aid for Scientific Research on Innovative Areas (Research in a proposed research area)
イノシトール燐脂質は、複雑に錯綜する細胞内の小胞輸送系を仕分ける上で大きな役割を担う。例えば初期エンドソームにはPI3P,ゴルジ装置にはPI4Pが局在し、それぞれのオルガネラの特異性に関わることが知られているが、それぞれの膜内の二次元的な分化は明らかでない。我々は膜脂質分布をナノレベルで解析し、サブオルガネラレベルの分化を明らかにすることを目的に研究を行っている。この目的に資するため、昨年度までに基本的な技法を確立した急速凍結・凍結割断レプリカ標識法(QF-FRL法)を幾つかの点で改良した。1)これまでに報告したPI(4,5)P2以外のイノシトール膜脂質を標識するプローブを開発した。PI3Pを含む複数のイノシトール膜脂質について、特異性、定量性などに優れたプローブを得ることができ、種々の細胞サンプルの解析に適用した。2)遺伝子機能との相関を系統的に解析するために、変異体の入手が容易な酵母細胞への適用を可能にした。急速凍結に加圧凍結法を用い、細胞壁を消化、除去することによって、良好な形態と標識を得た。PI3Pを含む複数の膜脂質についての解析を行った。3)細胞の前処理が不要であるQF-FRL法の特長を生かし、高度に分化した動物体内組織解析用に方法を改良した。小胞体、分泌顆粒、閉鎖結合、ギャップ結合などの発達したマウス膵外分泌細胞についての解析をほぼ終了し、投稿準備中である。これらの方法はイノシトール燐脂質を中心とする膜脂質の細胞内分布の解析を可能にし、細胞内ロジスティックスの分子機構の解明に大きく貢献すると考えられる。
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Proc Natl Acad Sci USA
Volume: (印刷中 未定)
Trends Glycosci Glycotech
Volume: 126 Pages: 173-181
10027892848
Methods Mol Biol
Volume: 657 Pages: 205-216
顕微鏡 (in press)(印刷中)
130007788944
